标记染料
菁染料是性能优良的荧光染料,摩尔吸光系数在荧光
染料中是无可比拟的,其琥珀酰亚胺酯是常用的脂肪氨基标
记试剂,广泛用于蛋白、抗体、核酸及其他生物分子的标记
和检测。通过改变次甲基链的长度, 可改变其荧光发射波长,
每增加一个双键,按照 Huoffman 规则正好红移约 100 nm。
水溶性菁染料 Cy3 和 Cy5 已成为基因芯片的普遍荧
光标记物;另外,Cy5, Cy5.5 和 Cy7 的吸收在近红外区背
景非常低,是荧光强度较高、稳定性较好的长波长染料。特
别适合于活体小动物体内成像代替放射性元素。
菁染料和生物分子的比例 F/P=4~12 之间荧光强度较
好, F/P 值过高荧光探针会自我淬灭并影响生物分子的生
物活性,标记生物分子普遍使用单琥珀酰亚胺酯,但是用双
修饰的 Cy Dye SE 并没有发现交联。Cy Dye SE 标记抗体在
pH (8.5~9.4)时 10 分钟 F/P 可达 5~6,而在 pH 7.0 几乎不
反应。我们用不同比例的 Cy3 标 anti-glutathione-S-transferase
(GST)多克隆抗体发现用 1:1, 5:1, 10:1 和 20:1 标记时得到
的 F/P 值分别是 0.28:1, 1.16:1, 2.3:1 和 4.6:1。