标记染料
菁染料是一类性能优良的荧光染料,摩尔吸光系数在荧
光染料中是无可比拟的,其琥珀酰亚胺酯是常用的脂肪氨基
标记试剂,广泛用于蛋白、抗体、核酸及其他生物分子的标
记和检测。通过改变次甲基链的长度, 可改变其荧光发射波
长,每增加一个双键,按 Huoffman 规则正好红移约 100 nm。
水溶性菁染料Cy3 和Cy5 已成为基因芯片的普遍荧光
标记物;另外,Cy5,Cy5.5 和 Cy7 的吸收在近红外区背景
非常低,是荧光强度较高、稳定性较好的长波长染料。特别
适合于小动物活体成像,代替放射性元素。
菁染料和生物分子的比例在 F/P=4~12 之间时荧光强
度较好,F/P 值过高荧光探针会自我淬灭并影响生物分子的
生物活性,标记生物分子常使用单琥珀酰亚胺酯,但是用双
琥珀酰亚胺酯修饰的 Cy Dye SE 并没有发现交联。Cy Dye
SE 标记抗体在 pH(8.5~9.4)时 10 分钟 F/P 可达 5~6,而
在 pH 7.0 时 几乎 不 反应 。 我们 用 不同 比 例的 Cy3 标
anti-glutathione-S-transferase (GST)多克隆抗体发现用 1:1、
5:1、
10:1 和 20:1 标记时得到的 F/P 值分别是 0.28:1、
1.16:1、
2.3:1 和 4.6:1。
菁染料琥珀酰亚胺酯(Cy Dye SE)的标记