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- 2025年07月11日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
53
- 英文名：
Mouse Anti-Bov IgG/PE-Cy5.5
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
详见说明书
- 规格：
瓶
1、本试剂为强烈型裂解液，可以提取核蛋白，但在提取核蛋白的同时，也会将基因组一并释放出来，造成细胞裂解液粘稠，此时可以直接加入蛋白上样缓冲液，煮沸再离心，离心后直接上样电泳;若想测定浓度，可入加少量SDS(1%)，煮沸后离心测浓度。本系列蛋白提取试剂所提取的蛋白由于含有去污剂，所以不适合使用Bradford蛋白浓度测定试剂盒，请选择BCA法或者Lowry法检测蛋白浓度。
2、如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散粘稠状物，随后离心取上清用于后续实验。
参数规格：
| 产品名称 | PE-Cy5.5标记的小鼠抗牛IgG价格 |
| 英文名称 | Mouse Anti-Bov IgG/PE-Cy5.5 |
| 货号 | YS-D12318 |
英文名称: Mouse Anti-Bov IgG/PE-Cy5.5
应用: IF=1:100-1000;not yet tested in other applications.optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.
浓度: 2mg/1ml
蛋白分子量: 150kDa
纯化方法: affinity purified by Protein A
使用方法：
1. 对于培养细胞样品
(1) 融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF (CAT:AP02L014)，使PMSF的终浓度为1 mM。
(2) 细胞裂解
对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1~2 s后，细胞就会被裂解。
对于悬浮细胞：离心收集细胞，按照6孔板每孔细胞加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液，混匀，充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，需分装成50~100万细胞/管，然后再裂解。(3) 充分裂解后，10000~14000 rpm离心3~5 min，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
2. 对于组织样品
(1) 把组织剪切成细小的碎片；
(2) 融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1 mM；
(3) 按照每20 mg组织加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量，具体RIPA裂解液的使用量参照表2。
(4) 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
(5) 充分裂解后，10000~14000rpm离心3~5 min，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
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文献和实验抗体二抗上连接有荧光染料。直接标记染色背景低，实验程序少尽量减少实验工序和过程，以保证实验的真实和准确性。因此在条件允许的范围内，建议尽量用直接标记的抗体进行实验。 3、流式抗体荧光标记的选择： 如果实验中检测单一指标：不同荧光标记在不同的仪器上强度不同。以某仪器为例：PE ＞APC ＞PE-Cy5 ＞PerCP ＞FITC ＞PerCP-Cy5.5，通常来说，PE最强，适用于弱表达抗原。FITC强度较弱，适用于强表达抗原，使用范围比较广。用户需根据检测的目标蛋白进行具体选择。 如果同时检测多个
内腔可产生高强度的磁场，足以分离磁微粒标记的细胞，无需分离柱提供提供更高强度的磁场。由于磁微粒极小，不会影响靶细胞的流式分析结果，因此不需要去除。除了现有的定型产品外，客户可选择EasySep® PE、FITC或生物素分选系统与自己的PE、FITC或生物素—偶联的单抗相结合，来富集任何所需的细胞。如果您有自己的小鼠IgG1抗任何细胞的抗体, 也可以使用“Do-It-Yourself”试剂盒做成TAC，用来分选您想要的细胞。此外，还可以根据您的特殊需要，专门为您设计定做试剂盒。用于正选小鼠的细胞标记
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