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- 2025年07月15日
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- 详细信息
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25
- 英文名：
Rabbit Anti-Biotin/PE-CY5
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
详见说明书
- 规格：
瓶
英文名称: Rabbit Anti-Biotin/PE-CY5
应用: Flow-Cyt=1:100-1000;IF=1:100-1000;not yet tested in other applications.optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.
浓度: 2mg/1ml
纯化方法: affinity purified by Protein A
实验操作步骤：
PE-CY5标记的兔抗生物素抗体IgG价格是用于测定细胞增殖或毒性实验中活细胞数目的一种高灵敏度，无放射性的比色检测法。CCK法应用非常广泛，如药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测等。下面以engreen的CCK8试剂盒为例，简要说明细胞增殖-毒性检测的操作步骤
方法/步骤
在96孔板中配制100μl的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养 24 小时 (在 37℃，5% CO2 的条件下)。
向培养板加入 10μl 不同浓度的待测物质。
将培养板在培养箱孵育一段适当的时间 (例如: 6,12, 24 或 48 小时)。
向每孔加入 10μl CCK8 溶液（engreen） (注意不要在孔中生成气泡，它们会影响 OD 值的读数)。
5. 将培养板在培养箱内孵育 1-4 小时。
用酶标仪测定在 450 nm 处的吸光度。
如果暂时不测定OD值，打算以后测定的话，可以向每孔中加10μl0.1 M HCl溶液或者1%wSDS 溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化 。
细胞周期检测的原理：
PI法是经典的周期检测方法。PI为插入性核酸荧光染料，能选择性的嵌入核酸DNA和RNA双链螺旋的碱基之间与之结合，其结合的量与DNA的含量成正比例关系，用流式细胞仪进行分析，就可以得到细胞周期各个阶段的DNA分布状态，从而计算出各个期的百分含量。PI染色后，假设G0/G1期细胞的荧光强度为1，那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2，正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1-2之间。
常用的细胞染色方法有:
1.简单染色法,常用碱性染料如美蓝等进行简单染色;
2.革兰氏染色法,主要包括结晶紫初染、碘液媒染、乙醇(或)脱色以及番红复染四个过程;
3.瑞氏染色法,瑞氏染料溶剂主要是由伊红美蓝组成;
4.吉姆萨染色法,吉姆萨染色原理与结果和瑞特染色法基本相同;
5.细胞免疫荧光染色法,免疫荧光染色的主要原理是利用抗原抗体之间的特异性结合。
蛋白提取/定量
蛋白提取频道,提供蛋白提取实验用蛋白提取试剂盒，蛋白裂解液，蛋白浓度测定试剂盒等蛋白质实验用试剂及耗材。其中蛋白提取系列包括：植物蛋白提取试剂盒，细胞组织蛋白提取试剂盒，胞膜/细胞核蛋白提取试剂盒，全蛋白提取试剂盒等。
操作说明：
一，微孔酶标仪法
1. 完全溶解蛋白标准品，取10ml，加240ulPBS稀释至250ml ，使终浓度为0.2mg/ml。待测蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见，也可以用0.9%NaCl或PBS稀释标准品。
2. 5×G250染色液使用前请颠倒3-5次混匀，取1ml 5×G250染色液，加入4ml双蒸水，混匀成1×G250染色液，此1×G250染色液可在4℃保存一周。
3. 将标准品按0, 2,4,6,8,12,16,20微升分别加到96孔板中，加PBS稀释液补足到20微升。
4. 将样品作适当稀释（zui好多做几个梯度，如作2倍、4倍、8倍稀释），加20微升到96孔板的样品孔中。由于移液器在取小量时的误差，标准线前面的点可能不很准确，所以尽可能的让样品点落在标准线1/2后。
5. 各孔加入200微升稀释后的1×G250染色液，室温放置3-5分钟。
6. 用酶标仪测定A595，或560-610nm之间的其它波长的吸光度。
7. 根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。
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文献和实验可以将干扰扣除，但补偿值越大，补偿后的信号分辨率会降低越厉害。最好选择很少或者没有重叠的荧光基团，以最大限度减少这种渗漏。不同激光激发的染料是首选，如PE和APC，但在某些情况下，这可能与尽量选择亮的荧光素的规则是冲突的。如在进行四色分析时，经常会将PE-Cy5标记的抗体与APC标记的抗体搭配使用。因为Cy5的激发波长与APC的激发波长相近，所以PE-Cy5与APC均可被红色激光（640nm）所激发，而两者的发送光谱也比较接近，导致PE-Cy5与APC的颜色补偿很难调整。相反，由于PE-Cy5.5中的
抗体二抗上连接有荧光染料。直接标记染色背景低，实验程序少尽量减少实验工序和过程，以保证实验的真实和准确性。因此在条件允许的范围内，建议尽量用直接标记的抗体进行实验。 3、流式抗体荧光标记的选择： 如果实验中检测单一指标：不同荧光标记在不同的仪器上强度不同。以某仪器为例：PE ＞APC ＞PE-Cy5 ＞PerCP ＞FITC ＞PerCP-Cy5.5，通常来说，PE最强，适用于弱表达抗原。FITC强度较弱，适用于强表达抗原，使用范围比较广。用户需根据检测的目标蛋白进行具体选择。 如果同时检测多个
内腔可产生高强度的磁场，足以分离磁微粒标记的细胞，无需分离柱提供提供更高强度的磁场。由于磁微粒极小，不会影响靶细胞的流式分析结果，因此不需要去除。除了现有的定型产品外，客户可选择EasySep® PE、FITC或生物素分选系统与自己的PE、FITC或生物素—偶联的单抗相结合，来富集任何所需的细胞。如果您有自己的小鼠IgG1抗任何细胞的抗体, 也可以使用“Do-It-Yourself”试剂盒做成TAC，用来分选您想要的细胞。此外，还可以根据您的特殊需要，专门为您设计定做试剂盒。用于正选小鼠的细胞标记
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