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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名:
SHCC
- 库存:
100
- 供应商:
赛泓瑞生物
- 细胞类型:
人结肠癌细胞Luciferase荧光稳转株
- 运输方式:
干冰/常温
- 年限:
10年
- 生长状态:
贴壁/悬浮
- 规格:
1*10^6cell/T25
| 产品名称: | HT29/Luc |
|---|---|
| 商品货号: | SHC-3235 |
| 中文名称: | 人结肠癌细胞Luciferase荧光稳转株 |
| 细胞污染: | HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌检测阴性。 |
| 培养条件: | MCCOYS 5A MED MOD+10%FBS |
| 细胞冻存步骤: | 待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面T25瓶为例; 1.细胞冻存时,弃去培养基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,细胞变圆脱落后,加入2ml完全培养基终止消化,可使用血球计数板计数。 2.1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮,加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀,按每1ml的数量分配到冻存管中,注意冻存管做好标识。明舟生物按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3.将冻存管置于程序降温盒中,放入-80度冰箱,至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 |
| 复苏细胞步骤: | 将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。 |
| 细胞传代步骤: | 如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 |








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文献和实验,无法达到持续表达外源基因的目的。一般用转染试剂进行质粒转染,多是瞬时转染。非常好,你能区分什么时候需要构建稳转株吗?细胞:需要构建稳转株的,有这些类型:1. 长期在目的细胞中研究基因功能;2. 部分蛋白半衰期极长,瞬时 RNA 只能干扰表达,无法去除已经表达的目的蛋白,想要实现更好的基因干扰效果;3. 想要实验更精准,筛选拷贝数适量的细胞进行实验研究;4. 需要用诱导表达系统的,主要是一些致死基因或者是需要时空表达的;5. 需要用细胞做动物实验的,比如裸鼠成瘤等。以下实验就不需要构建稳定
表达,以此来进行选择最后的融合位置。 表 1. 常用荧光蛋白特性 荧光素酶 荧光素酶(Luciferase)是自然界中能够催化荧光素产生生物发光的酶的统称,其中主要有萤火虫荧光素酶(Firefly luciferase,FLuc)和海肾荧光素酶(Renilla luciferase,RLuc)。荧光素酶报告系统非常灵敏,可以高效地检测基因的表达和细胞的活动情况,是分析转录因子与启动子活性、miRNA 与靶基因相互作用以及活体成像等的有效方法。 萤火虫荧光素酶(FLuc):FLuc 的底物是荧光素,催化
动物活体光学成像(Optical in vivo Imaging),指利用光学的探测手段结合光学探测分子对实验动物进行成像,来获得动物体内生物学信息的方法。根据探测方式的不同,光学成像可分为生物发光成像、荧光成像、上转换荧光成像、切伦科夫成像和 X-ray 成像等。其中,最常用到的是生物发光成像和荧光成像。生物发光是用荧光素酶(Luciferase)基因标记细胞或 DNA,而荧光技术则采用荧光报告基团(GFP、RFP、Cyt 及 dyes 等)进行标记。 动物活体光学成像通过将目的基因、细胞
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