- ￥900
- SHBio
- 进口
- SHC343
- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名：
SHCC
- 库存：
100
- 供应商：
赛泓瑞生物
- 细胞类型：
Vero-HCV-NS4B细胞
- 运输方式：
干冰/常温
- 年限：
10年
- 生长状态：
贴壁/悬浮
- 规格：
1*10^6cell/T25
| 产品名称： | Vero-HCV-NS4B |
|---|---|
| 商品货号： | SHC-3030 |
| 中文名称： | 非洲绿猴肾细胞系 |
| 细胞冻存步骤： | 待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例； 1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。明舟生物按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 |
| 复苏细胞步骤： | 将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 |
| 细胞传代步骤： | 如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 |
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文献和实验传代步骤比较传统：倒掉培养液－>PBS洗2遍－>胰酶0.25%消化－>倒掉胰酶－>加培养基－>用吸管吹打均匀－>分瓶－>放置37度，5%CO2孵箱。我的体会是：1、消化时间和实验环境温度也有很大关系，我们实验室条件比较差，不能维持恒温（不过我想大部分实验室目前也还是做不到的）。夏天的时候，消化特别快。但是到了冬天，就很慢，要用手捂老半天。2、消化到什么程度可以，经验很重要，如果每瓶消化都要通过显微镜观察来判断，首先效率太低，而且还很容易消化过头。对光观察培养瓶，当感觉到有些泛白，瓶角有少许细胞
多年来，国外已成功的研制了采用Vero细胞生产疫苗并获准上市，包括人用狂犬病纯化疫苗、脊髓灰质炎灭活（纯化）疫苗（IPV），并在中国注册或正在注册申请中。在上世纪九十年代后，国产的采用Vero细胞生产的人用狂犬病纯化疫苗、乙型脑炎纯化疫苗、肾综合征出血热纯化疫苗被批准上市。近年来，又有一些企业申请乙型脑炎纯化疫苗、脊髓灰质炎灭活（纯化）疫苗、甲型肝炎灭活疫苗进行临床研究或上市。随着采用Vero细胞生产疫苗种类的增多，并且使用人群扩大到婴幼儿，其细胞残留物质越来越受到关注，已成为我们审评中重点
一、实验背景 丙型肝炎病毒（HCV）是引起丙型肝炎的罪魁祸首，全球有 1.3 亿人慢性感染HCV并逐步 发展成肝硬化和肝癌，但就其致病机理却并不像其他肝炎病毒（如 HBV）一样清晰，在HCV进入肝细胞的过程中。一系列的受体识别和相互作用的参与其中，还包括由网格蛋白(clathrin)参与的内吞作用，但目前除 了受体之外，感染性 HCV 入侵的所需的其他的细胞分子还知之甚少。 二、实验方法 通过筛选了包含靶向标记 140 个细胞膜流通蛋白 siRNA 的文库
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