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- AAT Bioquest
- 美国
- 1430
- 2025年12月12日
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1
trFluor Eu 穴状化合物 琥珀酰亚胺酯
| 货号 | 1430 | 存储条件 | f/l |
| 规格 | 100 ug | ||
| Ex (nm) | 346 | Em (nm) | 617 |
| 分子量 | 1573.80 | 溶剂 | DMSO |
| 产品详细介绍 | |||
简要概述
trFluor Eu 穴状化合物 琥珀酰亚胺酯是美国AAT Bioquest生产的荧光染料，存在于细胞，血清或其他生物流体中的许多生物化合物是天然荧光的，因此使用常规的快速荧光团导致测定灵敏度的严重限制，这是由于待测定的生物分子的自发荧光引起的高背景。使用长寿命荧光团结合时间分辨检测（激发和发射检测之间的延迟）可以最大限度地减少瞬间荧光干扰。我们的trFluor™Cryptate Eu琥珀酰亚胺酯具有最高的稳定性和良好的水溶性。与其他商业Cryptate Eu探针相比，trFluor™Cryptate Eu琥珀酰亚胺酯仅具有单一反应性基团，消除了交联的可能性。与更传统的荧光团如Alexa Fluor或花青染料相比，这些trFluor™Eu探针具有较大的斯托克斯位移和极长的发射半衰期。与其他TRF化合物相比，我们的trFluor™Cryptate Eu探针具有极高的稳定性，高发射产率和选择性标记生物分子的能力。此外，我们的trFluor™Eu探针在与抗体等生物聚合物结合时对荧光猝灭不敏感。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的trFluor Eu 穴状化合物 琥珀酰亚胺酯。
产品说明书
染色样本分析
操作步骤
1.准备蛋白质储备溶液（溶液A）：
将100μL反应缓冲液（如1 M碳酸钠溶液或1 M磷酸盐缓冲液，pH~9.0）与900μL目标蛋白溶液（如抗体，蛋白质浓度> 2 mg / ml，如果可能）混合至100μL给予1 mL蛋白质标记原液。
注1：蛋白质溶液（溶液A）的pH值应为8.5±0.5。如果蛋白质溶液的pH低于8.0，则使用1M碳酸氢钠溶液或1M pH 9.0磷酸盐缓冲液将pH调节至8.0-9.0的范围。
注2：蛋白质应溶解于pH7.2-7.4的1X磷酸盐缓冲盐水（PBS）中。如果蛋白质溶解在Tris或甘氨酸缓冲液中，则必须用pH7.2-7.4的1X PBS透析，以除去广泛用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐（例如硫酸铵和乙酸铵）。
注3：用牛血清白蛋白（BSA）或明胶稳定的不纯抗体或抗体不能很好地标记。
注4：如果蛋白质浓度低于2 mg / mL，则结合效率会显着降低。为获得佳标记效率，建议极终蛋白质浓度范围为2-10 mg / mL。
2.准备染料储备溶液（溶液B）：
将无水DMSO加入到iFluor 染料SE小瓶中以制备10-20mM储备溶液。 通过移液或涡旋混合均匀。
注意：在开始缀合前准备染料储备溶液（溶液B）。 及时使用。 染料储备溶液的长期储存可降低染料活性。 溶液B可在冰箱中保存两周，避光保存。 避免冻融循环。
3.确定佳染料/蛋白质比例（可选）：
注意：每种蛋白质都需要不同的染料/蛋白质比例，这也取决于染料的性质。蛋白质的过度标记可能不利地影响其结合亲和力，而低染料/蛋白质比率的蛋白质缀合物会降低灵敏度。我们建议您通过使用连续不同量的标记染料溶液重复步骤4和5来实验确定佳染料/蛋白质比率。通常，对于大多数染料 - 蛋白质缀合物，推荐使用4-6种染料/蛋白质。
3.1使用10：1摩尔比的溶液B（染料）/溶液A（蛋白质）作为起始点：将5μl染料储备溶液（溶液B，假设染料储备溶液为10 mM）加入到样品瓶中。蛋白质溶液（95μl溶液A）有效摇动。假设蛋白质浓度为10mg / mL并且蛋白质的分子量为~200KD，蛋白质的浓度为~0.05mM。
注意：蛋白质溶液中DMSO的浓度应<10％。
3.2运行缀合反应（参见下面的步骤4）。
3.3重复＃3.2，溶液B /溶液A的摩尔比为5：1;分别为15：1和20：1。
3.4使用预制的旋转柱纯化所需的缀合物。
3.5计算上述4种结合物的染料/蛋白质比（DOS）（见说明书）。
3.6运行上述4种结合物的功能测试，确定佳的染料/蛋白质比例，以扩大标记反应。
4.运行结合反应：
4.1有效加入适量的染料储备溶液（溶液B）到蛋白质溶液（溶液A）的小瓶中晃动。
注意：溶液B /溶液的佳摩尔比由步骤3.6确定。如果跳过步骤3，我们建议使用10：1溶液B（染料）/溶液A（蛋白质）的摩尔比。
4.2继续在室温下旋转或摇动反应混合物30-60分钟。
5.纯化缀合物
以下方案是使用Sephadex G-25柱纯化染料 - 蛋白质缀合物的实例。
5.1按照制造说明准备Sephadex G-25色谱柱。
5.2将反应混合物（直接从步骤4）加载到Sephadex G-25柱的顶部。
5.3样品在顶部树脂表面下方运行时立即加入PBS（pH 7.2-7.4）。
5.4向所需样品中加入更多PBS（pH 7.2-7.4）以完成色谱柱纯化。 合并含有所需染料 - 蛋白质缀合物的级分。
注1：立即使用时，染料 - 蛋白质偶联物需要用染色缓冲液稀释，并等分多次使用。
注2：对于长期储存，染料 - 蛋白质缀合物溶液需要浓缩或冷冻干燥
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文献和实验。 然而，这些非常有吸引力的工作并不能掩盖挡在 FRET技术前面的困难。例如，因为它的自发荧光，所测的荧光强度必须被校正，未结合的发色团极大地的抑制了分析的灵敏性以及将后续的结果分析复杂化。如果滤掉供体/受体发射谱，又会导致对受体发出的长寿命的荧光信号探测的灵敏性下降。因此， CIS bio international发展了HTRF技术，这为深入而广泛地研究受体-供体对间的相互作用提供了可能性。该技术是利用了具有穴状结构的Eu元素的螯和标记物和XL665作为一个供配体对。HTRF技术的的特点包括
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