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- 汉恒生物
- HB-DLR-100
- 中国
- 2025年11月11日
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汉恒生物
萤火虫萤光素酶（firefly Luciferase，F-Luc）， 61kDa，可催化D-荧光素发出萤光
海肾萤光素酶（Ranilla luciferase，R-Luc）， 36kDa，可催化腔肠素发出萤光
特点：
1.底物存在时，催化底物发出萤光
2.萤光亮度和萤光素酶的量成正比
应用
miRNA和靶基因结合双萤光素酶验证方案
miRNA是一类由内源基因编码的长度约为22 个核苷酸的非编码单链RNA分子，通过靶向结合目的基因的结合位点（通常位于基因的3端非编码区——3UTR区），抑制其上游基因的表达。
鉴于miRNA的特点及luc的特性。 miRNA及其靶结合位点的验证可以通过双荧光实验来实现：包括miRNA与其靶点相关分析，miRNA靶基因验证、lncRNA与circRNA 吸附miRNA验证等
检测原理：
把miR潜在结合构建到报告载体上F-Luciferase下游，将报告载体与 miR的mimics共同转染到细胞内测定荧光素酶值，分析F-Luciferase活性即可反应miRNA与结合位点的结合特性
检测方法及载体工具：
把miR潜在结合位点上下游~500bp（he/或突变位点）构建到荧光素酶报告载体上psiCHECK2的F-Luciferase下游3UTR区，载体上持续性表达R-Luciferase元件作为内参， 与miR的mimics（小片段双链miRNA ）/ NC共同转染293T细胞共同转染到细胞内测定荧光素酶值，分析F-Luciferase活性即可反应miRNA与结合位点的结合特性
产品规格
Dual-Luciferase Reporter Assay Kit (100 rxns)
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Luciferase Reaction Buffer 10 ml
Luciferase Reaction Substrate (Lyophilized) 1 vial
Luciferase Reaction Buffer II 10 ml
Luciferase Reaction Substrate II（125X） 80μL
实验步骤：
一、细胞转染
转染48 h后收集样检测。
二、荧光检测
1. 将培养箱中的24孔板取出，放在室温，至细胞平衡到室温。
2. 加入细胞裂解液Lysis Buffer，充分裂解后12000rpm 4℃离心10min并转移至96孔板中。
3. 每孔加入F-Luc底物试剂，放入酶标仪中测定记录Firefly luciferase值。
4. 每个孔中加入Stop solution终止F-Luc反应并淬灭F-Luc荧光
5. 每孔加入R-Luc底物放入酶标仪中测定记录Renillaluc luciferase值
6. 计算Firefly luciferase相对荧光值F-Luc/ R-Luc
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文献和实验来自生物体的发光现象，叫做生物发光。是生体释放能量的一种形式，这种发光现象广泛地分散在生物界中。动物的发光，除其自身发光即一次的发光以外，由寄生或共生而产生二次发光的例子也不少。生物发光是化学发光，也是氧化发光的一种。与发光直接有关的物质，根据对萤叩头虫、壳头海笋、萤虫、赫氏海萤（CyPridin hilgendorffi ）、发光细菌等的研究，已知为对热稳定和不稳定的两种成分，分别称为荧光素和荧光素酶。但也有许多生物的发光并没有证实有此二种成分。荧光素 - 荧光素酶反应引起的发光可分
生物发光是一种依赖于酶和底物的相互作用来产生光的化学过程。所需的酶被称为荧光素酶，底物因荧光素酶的类型而不同（如荧光素）。 常用荧光素酶信息表： 其中最有代表性的是来自萤火虫体内（Firefly）和海肾（Renilla）体内的两类萤光素酶，分别命名为萤火虫荧光素酶（FLuc）和海肾荧光素酶（RLuc），同时近年来研究得较多的是来源于高斯氏菌的高斯荧光素酶（GLuc）。 萤火虫荧光素酶（FLuc）作为最通用和最常见的报告基因，该蛋白质不需要翻译后修饰即可获得酶活性，可用于原核和真核细胞。FLuc
亦称发光酶。是催化生物发光的酶系的总称。它是光物质的冷水抽提物在氧中发光时，底物虫荧光素被消耗以后残余的对热不稳定的高分子成分。现在对萤虫相海萤以及发光细菌的虫荧光素酶结晶物的研究得最多。它们属于加氧酶（ oxygenase），不含金属和辅酶。对于发光，有的酶必须以 ATP等作为辅助因子，有的则不需要。其发光机制等已了解到可因种的不同而有很大的差异，虫萤光素酶具有高度的特异性，一般仅作用于来自近缘种的虫荧光素。当然，萤虫、海萤的酶是不能互相代替引起发光的。海萤的虫荧光素酶
