滤膜肠球菌琼脂/BR

一篇搞定 IP、co-IP 实验

的，但是这结果是不是假阳性呢？还得做个阴性对照。阴性对照如何设置呢？考虑到整个实验体系会出现 beads、抗X抗体、诱饵蛋白 X、靶蛋白 Y（co-IP）： 可能出现的假阳性来源 需要的阴性对照 抗 X 抗体结合非特异的蛋白 与 IP 一抗种属亚型相同的免疫球蛋白（比如，抗 X 抗体是 Mouse IgG，阴性对照可使用 Mouse 免疫球蛋白） beads 对蛋白的非特异结合* 同上，此外还可进行 Pre clear，IP 正式实验前排除非特异结合蛋白。如果使用琼脂

酵母双杂交实验常见问题及其解决方法

Trp平板上，转化效率应该在1 x105 colonies/mg DNA以上。 4.杂交效率不高，该如何处理? 在杂交中，预转化的诱饵细胞的数量可能不够。当对诱饵菌株进行液体培养过夜时，应挑选大的、新鲜的克隆进行培养，经过离心和重悬后，再使用血球计对细胞进行计数。密度应该在1 x109/ml。 一个甚至两个融合蛋白对酵母细胞有毒。你可以通过重组方法来减轻毒性，同时又能保证蛋白的相互作用。或者使用表达水平较低的载体。也可以在琼脂平板或滤膜上进行杂交。但同时必须作杂交对照实验。

用原位筛选法分离编码序列特异性DNA结合蛋白的cDNA

噬菌体感染的大肠杆菌样品中，颠倒 2 ～ 3 次后倒入 150mm 的噬菌体平板（已在 37 ℃预热 30 分钟）上。向各个方向倾斜使软琼脂完全覆盖表面，避免产生气泡。 6． 室温下使软琼脂糖固化（需 5 分钟），倒扣平板在 42 ℃下培养 4 小时。 7． 在培养期间，用圆珠笔标记 132mm 硝酸纤维素滤膜。 8． 在 10mmol/L IPTG 水溶液中浸泡硝酸纤维素膜几分钟，使滤膜风干，但不要完全干燥。