康宁Corning 3474 96孔超低吸附微孔板，带盖，单

肿瘤成球实验以及肿瘤球体增殖/活力检测方案

方法。 收获细胞（保证健康的单细胞悬液）。 使用胰蛋白酶-EDTA 溶液 ( T3924 ) 分离上述贴壁细胞。Millicell® Digital Cell Imager（MDCI10000）观察到细胞融合度应为80-90%，且状态良好。 以300 x g离心细胞悬液 5分钟并吸出上清液。将细胞重悬于少量培养物中，例如 3-5 mL 的 3dGRO™ 球状体培养基 ( S3077 ) 注：可让细胞穿过40 µM细胞过滤器或带细胞过滤器卡扣盖的5 mL 圆底聚苯乙烯试管，以实现单细胞悬浮。

滤器的使用

，滤器应处于水平状态，拧上盖动作要轻缓，这两点可防止滤膜移动偏离，另外需要适度拧紧。 （4)每个滤器用牛皮纸单个包装，放入铝/不锈钢/微波冻存盒、然后常规高压蒸气灭菌。 （5)使用时，注意无菌操作，在打开牛皮纸包装，取出时， 特别是滤器出口部分需保证绝对无菌。 （6)用注射器抽取待过滤液体，装在滤器进口上，先轻轻推一点点液体，使滤膜湿润，然后梢用力推进，一般情况下，如果不是粘稠液体，阻力不大，一个滤器通常可以过滤10mi左右或更多。 （7)【最重要的就在这一步】，过滤完液体后，必须检查刚才

细胞培养板的选择和使用（二）

O inside those 36 wells.  首先你要尽可能把消化细胞消化成单个细胞（不要成团），反复吹打，掌握好时间（不同的细胞要摸索的），种细胞时要均匀的吸取，清清的吹打一遍再吸取细胞，这样也许会解决您的问题。我以前也是出现这样问题。后来就很好了！！ 种到96孔板的细胞一定要消化成单个细胞，建议用EDTA和胰酶消化。加血清后反复吹打。细胞量尽量少一点。 我一般在铺板时都是用八排枪加样的，感觉效果还不错。首先如楼上所说要把细胞消化的恰到好处，背着光看瓶底细胞都下来后再对着瓶壁吹打几次即可。然后将细胞悬液转移到加样