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文献和实验相关专题 成功走出第一步:DNA提取 碱裂解法 大量提取质粒(500mL菌液) 1、取培养至对数生长后期(一般培养12~16小时)的含待提质粒的细菌 培养液于离心杯中,配平,4℃下4000rpm离心15min,弃上清,然后将离心管倒置于干净的约纸上使上清液全部流尽。 2、向盛有细菌 沉淀物的离心管中加入20mL冰冷的溶液Ⅰ,重悬沉淀(先加5mL溶液Ⅰ,用干净的玻璃棒搅拌均匀后,再加剩下的部分)。
.27. Column Buffers Make 500mls equivalent of base buffer: 10ml 1M Hepes pH 7.9 100ml 10% glycerol 5ml 10% NP40 (or 5.0ml 300mM Octyl glucoside) 200ml 0.5 EDTA ------- 115.2ml /5 = 23ml Base 1M KCl2.5M KCl dH20 for 0 KCL 46ml 0 0 154ml = 200
in the column matrix!! 8)Wash column with 5 column volumes of lysis buffer containing no DMSO!! --> NOTE: DMSO strips proteins off of the coulumn! 9)Run a 40 ml salt gradient collecting 1 to 2 ml fractions: - Start at 0 mM NaCl and end with 500 mM NaCl. 10
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