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文献和实验actin,山东大学提供样品基因。cDNA制备:测定小鼠肝脏总RNA浓度后,使用BioTeke Super RT Kit 制备20μl cDNA.操作步骤参照试剂盒说明书。一步法荧光定量PCR:Bioteke One-step SYBR real-time RT-PCR Kit20μl反应体系包括:10μl 2×One-step SYBR premixture,7.2μl RNA Free Water,0.4μl Primer F,0.4μl Primer R,1μl cDNA,1μl One-step
Equipment And Reagents For Real-Time PCR
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可以获得真核生物 mRNA 全长;当 RNA 没有 polyA 尾(原核 mRNA 或 rRNA)或断裂时,就需要考虑使用随机引物进行 RNA 的反转录,随机引物可以很均一的逆转出 RNA 上的信息,但逆转出的 cDNAs 长度都较短。此时,对于扩增真核生物的 total RNA 来说,这时随机引物和 Oligo-dT 引物的混合物能给出一个令人满意的结果。 诺唯赞的 HiScript® III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (+gDNA wiper)(R312)或可助
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