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文献和实验Real-time qPCR 手册——手把手教你从菜鸟到高手
TaqMan@探针和分子信标,利用与靶序列特异杂交的探针来指示扩增产物的增加;一类为非探针类,其中包括如 SYBR@Green I 或者特殊设计的引物(如 LUX @Primers ) 通过荧光染料来指示产物的增加。 3.1 Taqman@探针法 Taqman@探针是最早用于定量的方法。就在 PCR 扩增时加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸:5’端标记一个报告荧光基团,3’端标记一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收,也就是 FRET 反应
Real-time qPCR手册---手把手教你从菜鸟到高手
3.3 SYBR@Green 法 SYBR@Green I是一种结合于小沟中的双链DNA结合染料,与双链DNA结合后,其荧光大大增强。这一性质使其用于扩增产物的检测非常理想。SYBR@Green I 的最大吸收波长约为497nm,发射波长最大约为520nm。在PCR反应体系中,加入过量SYBR@Green 荧光染料,SYBR@Green 荧光染料特异性地掺入DNA双链后,发射荧光信号,而不掺入链中的SYBR@Green 染料分子不会发射任何荧
那是一个不平凡的年代—— 2009 年,那年的下半年我一直在跟 RNA 提取、逆转录和 SYBR GREEN realtime-PCR 反应做斗争。 当我艰难摸索的时候,我就想:等我都学会了,我一定要写篇文章,把一个初学者最初的想法和觉得矛盾、困难、不知如何入手的方法、难点和最后解决的办法写出来。既可以帮助像我一样的人,又可以让自己有点小小的成就感。好了,现在开始吧。 仪器 ABI7000 是如何做溶解曲线的? 我们单位刚开始的时候只有一台仪器 ABI
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