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100ml
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文献和实验膜染色 孵育 24 小时后,弃去孵育液,用 PBS 清洗细胞 3 次 配制所需染色工作液体积 加入 300μL 色工作液,轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞 37℃ 避光孵育细胞 8 min。 吸除细胞膜染色工作液,或 PBS 洗涤 3 次,每次 5 min 使用 4% 多聚甲醛在室温下固定 10 min 后观察细胞形态 弃去 4% 多聚甲醛,用 PBS 清洗细胞 3 次,每次 5 min 取出细胞爬片,用含 DAPI 封片剂进行封片 激光共聚焦拍照 3.2. 细胞骨架染色 孵育 24 小时后,弃去孵育
一、免疫荧光技术中标本制作的基本程序近似于酶免疫组化,不同点如下: 1、免疫荧光不需要使用双氧水处理,封闭和一抗孵育与其相同。 2、免疫荧光的二抗使用不同荧光标记的二抗孵育,孵育时间根据抗体的工作浓度确定。 3、二抗孵育之后充分洗片后即可贴片、封片和观察。 4、免疫荧光在封片时常使用专用封片剂或甘油:0.01M PBS (1:1)。条件许可,建议购买抗淬灭的封片液,使标本可以保存更久。 5、荧光抗体的孵育以及后续处理需要避光。 6、荧光抗体染色假阳性可能会多,需要分别设定阳性和阴性
苯( 1 : 1 )稍洗。8、 二甲苯透明 2 ~ 3 次。9、 中性树胶封固。 (三) Giemsa 染色 1、收集细胞( 1 × 106 ), PBS 洗 1 次。2、用细胞涂片离心机制成细胞涂片。3、甲醇固定 3 ~ 5min 。4、入 Giemsa 稀释染色液 15 ~ 30min ,冬天在 37 ℃温箱中染色。5、用磷酸盐缓冲液分色,以镜下控制为准。6、涂片晾干后用中性树胶封片。(四)瑞氏( Wright )染色 1、收集细胞( 1 × 106 ), PBS 洗 1 次。2、用细胞涂片离心机制成细胞
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