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58
- 英文名:
Cy3标记的兔抗长爪沙鼠IgG
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详见说明书
- 供应商:
上海博湖
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详见说明书
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瓶
ul×支1,6,',',6'-O-Pentaacetyl-O-trans-p-coumaroylsucrose11
BM+ DNA Markerul×支Sibiricose A1176'-芥子酰基蔗糖
ul×支Ethyl 1-hydroxy-α-linolenate15
BM DNA Markerul×支(-)-Phaselic acid1
小鼠诱导型合成酶(iNOS)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 Nandrolone 434-22-0 中文名:诺龙 分子式:C18H26O2 度:98.0% 关键词:
小鼠诱导型合成酶(iNOS)ELISAKit ELISA. 96T/48T N-(2-Methyl-5-nitrophenyl)-4- (pyridin-3-yl)pyrimidin-2-amine 中文名: 分子式:C16H13N5O2
小鼠诱导型NO合酶elisa试剂盒
产品名称:Cy3标记的兔抗长爪沙鼠IgG
英文名称:Rabbit anti-MG IgG/Cy3
应用: IF=1:100-1000;not yet tested in other applications.optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.
浓度: 2mg/1ml
蛋白分子量: 150kDa
纯化方法: affinity purified by Protein A
| 产品名称 | Cy3标记的兔抗长爪沙鼠IgG |
| 英文名称 | Rabbit anti-MG IgG/Cy3 |
| 货号 | BH-DB7629 |
操作步骤:
Ⅰ 实体组织蛋白的提取
1. 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制剂, 1 μL蛋白酶抑制剂和 5μL 100mM PMSF,混匀。冰上保存数分钟待用。
2. 每100mg固体组织置于培养皿中,手术剪剪碎成3mm×3mm左右的小块,加入0.5~1 mL冷 Lysis Buffer,玻璃匀浆器上下手动匀浆15次,注意低温操作;
3. 取组织匀浆液转移到1.5mL预冷的离心管,离心10000转/分,4℃离心5 min;
4. 取上清转移至新的预冷的离心管中,即为全蛋白提取物,蛋白定量(Bradford法、BCA法);
5. 分装保存于-70℃,避免反复冻融。
Ⅱ 培养细胞蛋白提取
1. 贴壁培养的细胞,吸去培养基后,加入10mL/150mm培养板的冷PBS洗两次,每次振摇数次以尽量去除培养液;
2. 悬浮培养的细胞或用细胞刮子刮下的贴壁细胞,将细胞及培养液移至离心管中, 1000转/分离心10 min,再用10mL/150mm培养板的冷PBS,1000转/分离心5 min洗两次;
3. 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制剂, 1μL蛋白酶抑制剂和5μL 100mM PMSF,混匀。冰上保存数分钟待用。
4. 细胞洗涤后,转至新的预冷的离心管中,加入上述配制好的冷Lysis Buffer,加入量如下表所示:
| 细胞数量 | Lysis Buffer加入量 |
| 107个 | 0.5 mL~1 mL |
| 5×106个 | 0.2 mL~0.5 mL |
6. 14,000rpm,4℃离心15min,取上清为全蛋白提取物, 蛋白定量(Bradford法、BCA法);
7. 分装保存于-70℃,避免反复冻融。
固定液的应用:
1.单纯固定液(1)4%中性甲醛固定液:zui常用的固定液,能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作。一般无特殊要求的病理标本均适用。尤其值得注意的是,中性甲醛是以pH7 2~7 4的磷酸缓冲液为溶剂配制的,其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的4%甲醛固定液。此固定液配制后应密封…
1.单纯固定液
(1)4%中性甲醛固定液:zui常用的固定液,能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作。一般无特殊要求的病理标本均适用。尤其值得注意的是,中性甲醛是以 pH 7.2~7.4的磷酸缓冲液为溶剂配制的,其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的4%甲醛固定液。此固定液配制后应密封并保存在阴凉处,保存时间不 超过一个月。
(2)乙醇固定液:使用时以80%~95%的浓度为宜,具有硬化、固定、脱水等作用,对组织渗透力较弱,因此很少单独使用,但其保存组织中的核酸强于中性甲醛,故常用于有核酸操作的实验或检查,如果用于证明尿酸结晶和保存糖原,可用100%乙醇固定组织。
(3)4%的多:主要用于培养细胞的固定。
2.混合固定液
(1)乙醇一甲醛(乙醇-福尔马林,AF)固定液:适用于皮下组织中肥大细胞的固定。该固定液有固定兼脱水作用,固定后的标本可直接入95%乙醇脱水。
(3)Bouin固定液:特别适用于睾丸活检组织的固定。Bouin液对组织固定较均匀,收缩很少,不会使组织变硬变脆。需现配现用。
(4)Carnoy固定液:穿透能力强,可很好的固定细胞质和细胞核,特别适合于固定外膜致密的组织,亦适用于糖原及尼氏小体的固定。
(5)Zenker固定液:经此液固定的标本,细胞核和细胞质染色颇为清晰,但成本较昂贵且需特殊处理汞。该固定液要避免接触阳光,以免引起化学变化而失效
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文献和实验FITC标记的B抗体染色,根据两种抗体的动物种属不同,可用直接法也可用间接法,结果A抗原呈现橘红色荧光,而B抗原呈现黄绿色荧光。在应用中,常用的方法是免疫荧光组织化学中间接法和SABC-Cy3法相结合。例如,在实验设计时,选择小鼠抗大鼠A和兔抗大鼠B作为两种不同的特异性一抗,相匹配的二抗分别为FITC-抗小鼠IgG和生物素化―抗兔IgG。进行双重染色时,由于两种一抗种属来源不同,可把一抗混合使用。孵育结束后洗涤未结合的一抗,滴加二抗时,先加人生物素化―抗兔IgG(二抗)孵育,洗涤后,滴加SABC-Cy3
二抗, 蓝色AMCA荧光标记 AMCA AffiniPure Goat Anti-Rat IgG(H+L) 产品详情兔抗山羊IgG二抗, 蓝色AMCA荧光标记 AMCA AffiniPure Rabbit Anti-Goat IgG(H+L) 产品详情山羊抗兔IgG二抗, 蓝色AMCA荧光标记 AMCA AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG(H+L) 产品详情山羊抗小鼠IgG二抗, 蓝色AMCA荧光标记 AMCA AffiniPure Goat Anti-Mouse
,可以观察荧光。2、做荧光双标,一抗可以同时加,二抗也同时加。但是,两个一抗要不同种属来源,两个二抗用不同的荧光标记。比如说,第一个一抗为鼠抗A(单抗),第二个一抗为兔抗B;第一个二抗为抗鼠IgG(cy2标记,绿色荧光),第二个二抗为抗兔IgG(cy3标记,红色荧光)。在荧光显微镜下观察时,可以在同一个视野分两次激发观察,并分别照相,再将两次照相叠加。这样可以在同一个细胞内,观察抗原A和抗原B的亚细胞定位。3、用转了绿色荧光蛋白的细胞来做另一种荧光检测,不会有什么问题。最好用cy3标记的二抗去染另一
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