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50
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深圳子科生物
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100T
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文献和实验通用,尤其是在进行动态检查时。医琳师妹:我将我所作的方法与大家共享:吖啶橙/溴化乙锭双荧光染色测定PC12细胞凋亡(acridine orange/ethidium bromide, AO/EB):(1)细胞爬片:在6孔培养板中预先置入玻璃盖玻片,接种细胞悬液,干预后,予95%乙醇固定15分钟,微干,然后准备荧光染色。将100mg/L溶于PBS的吖啶橙和100mg/L溶于PBS的溴化乙锭各5μl(临用前混合加入,加样量宜小,有时各2μl-5μl足够,量太大容易形成细胞凋亡的假阳性),在照相前混匀
化碳,条件稳定后(5%二氧化碳:5%氧气),将细胞置入培养,分别培养30分钟、1小时、2小时、3小时、6小时、12小时,取出细胞,将细胞吹打成细胞悬液,1000r/min离心30分钟,倾去上清,PBS洗涤一次,离心去上清后,迅速注入3ml 4℃70%的冷乙醇,边注入边振摇,同时反复通过7号针头的注射器抽打5次(或用振匀器振匀),以避免细胞成团,送流式细胞仪PI检测。 10、吖啶橙/溴化乙锭双荧光染色测定细胞凋亡(acridine orange/ethidium bromide, AO/EB):(细胞
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