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抗荧光衰减封片剂(含DAPI)

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  • 博湖
  • BH-DB6644
  • 进口、国产
  • 2025年07月15日
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    • 英文名

      Mounting Medium, antifading (with DAPI)

    • 保质期

      详见说明书

    • 供应商

      上海博湖

    • 保存条件

      -20℃,避光,有效期1年

    • 规格

    免疫球蛋白:
    产品细节图片1
    产品参数:
     
    产品名称 抗荧光衰减封片剂(含DAPI
    英文名称 Mounting Medium, antifading (with DAPI)
    货号 BH-DB6644
    产品名称:抗荧光衰减封片剂(含DAPI
    别名 DAPI染色封片剂

    英文名称 Mounting Medium, antifading (with DAPI)
    储存条件 -20℃,避光,有效期1
    单位 瓶
    产品简介: 抗荧光衰减封片剂是一种用于减缓荧光衰减的封片试剂。以甘油为基础,加入抗荧光衰减剂,有强烈的 抗荧光衰减作用,用于对荧光组织和细胞样品的封片。封片后,样品 4℃或者-20℃避光可保存 2-3 周。本试 剂操作简单,在封片时用移液枪滴一滴抗荧光衰减封片液,盖上盖玻片就可以了。 抗荧光衰减封片剂内含 DAPI 4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole),是一种能够与 DNA 强力结合的荧光染料,常用与荧光显微镜观测。因为 DAPI 可以透过完整的细胞膜,它可以用于活细胞 和固定细胞的染色,显微镜下可以看到显蓝色荧光的细胞。DAPI 和双链 DNA 结合后,最大激发波长为 360nm 最大发射波长为 460nm。 
    别名 DAPI染色封片剂
    英文名称 Mounting Medium, antifading (with DAPI)
    储存条件 -20℃,避光,有效期1
    单位 瓶
    产品简介: 抗荧光衰减封片剂是一种用于减缓荧光衰减的封片试剂。以甘油为基础,加入抗荧光衰减剂,有强烈的 抗荧光衰减作用,用于对荧光组织和细胞样品的封片。封片后,样品 4℃或者-20℃避光可保存 2-3 周。本试 剂操作简单,在封片时用移液枪滴一滴抗荧光衰减封片液,盖上盖玻片就可以了。 抗荧光衰减封片剂内含 DAPI 4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole),是一种能够与 DNA 强力结合的荧光染料,常用与荧光显微镜观测。因为 DAPI 可以透过完整的细胞膜,它可以用于活细胞 和固定细胞的染色,显微镜下可以看到显蓝色荧光的细胞。DAPI 和双链 DNA 结合后,最大激发波长为 360nm 最大发射波长为 460nm
    注意事项: 
     1、不同细胞或组织样品所需的固定时间有所不同,应当根据细胞或组织的种类以及组织块的大小来调整固定时间。
     2、虽然作用温和,但能硬化组织,固定时间过久会导致组织变脆,切片时易碎。因此固定时间通常不宜超过 24 小时。
     3、醛基与抗原蛋白的氨基交联形成羧甲基,使抗原决定簇的三维构象出现空间障碍。分子间交联形成的网格结构可能部分或 完全掩盖某些抗原决定簇,使之不能充分暴露,可造成假阴性的染色,影响免疫组化结果。因此,4%固定的细胞或组织样品在进行免疫组化检测时,有时需要对抗原先进行修复,然后才能进行免疫染色等后续操作。
     4、本产品对人体有害,操作时请小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
     5、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作

    操作步骤:
    根据使用量,取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF,使 PMSF 的zui终浓度为 1mM。混匀备用(PMSF 现用现加)。
    1、样品前处理:
    a)对于贴壁细胞:去除培养液,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照 6 孔板每孔细胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。
    b)对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液,再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成 50-100 万细胞/管,然后再裂解。
    c)对于组织样品: 把组织剪切成细小的碎片。按照每 20mg 组织加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量)。用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。
    2、后处理:
    将裂解后的样品 10000-14000g 离心 3-5 分钟,取上清,即可进行后续的蛋白浓度测定、SDS-PAGE、Western blotting 和免疫沉淀等操作。

    温馨提示:
        工作液与浓缩液选择的技巧,以及各自的优势。
    1,工作液的优势:工作液操作方便,降低实验操作步骤,对于要求无菌的实验,降低染菌风险。
    2,浓缩液的优势:浓缩液成本相对较低,实验范围更广,对于不要求无菌的实验,可以进行多种浓度的实验分析以及比较。而且由于浓度高,保存更加稳定。

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    图标文献和实验
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    • 免疫荧光实验指南

      纸吸干爬片上的液体,用荧光淬灭剂的封片液封片,在荧光显微镜下观察采集图像。

    • 一文理清免疫荧光实验流程和常见问题

      PBST, 在摇床上缓慢摇动洗涤5 min,共洗涤3次。 5. 荧光二抗孵育 用吸水纸吸尽洗涤液后滴加稀释好的荧光二抗,湿盒中孵育1h后,回收二抗,接着用PBST洗3次,每次5 min;由于荧光容易淬灭,故从加荧光二抗起,后面所有操作步骤都要避光。  6. 复染核(定位的关键) 在玻片上滴加DAPI,并注意避光孵育5min,对标本进行染核,然后用PBST洗3次,每次5min,洗去多余的DAPI。 7. 封片 用吸水纸吸干爬片上的液体,用荧光淬灭剂的封片液封片,然后在荧光显微镜下观察

    • DAPI染色

      ;(2)DAPI工作液室温染色5~20分钟(可根据实验材料的染色结果而定);(3)PBS漂洗;(4)水溶性封片剂封片,游离细胞也可直接用DAPI的PBS封片;(5)荧光显微镜观察。结果:正常的细胞核呈强荧光,细胞质无荧光;固定的组织细胞同样处理,亦可得到相似的染色结果。在有支原体污染的细胞质和细胞表面可见孤立的点状荧光,在感染痘苗病毒的细胞质中存在独特的“星状”荧光簇(star-like fluorescent clusters),腺病毒感染早期胞质中也可出现荧光。

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