增强型DAB显色试剂盒（20×）

产品参数：
 

产品名称	增强型DAB显色试剂盒（20×）
英文名称	Metal Enhanced DAB Substrate Kit,20×
货号	BH-DB6584

产品名称：增强型DAB显色试剂盒（20×）
别名　增强型DAB显色试剂盒（20×）
英文名称　Metal Enhanced DAB Substrate Kit,20×
储存条件　-20℃，避光，有效期1年
单位　瓶
产品简介：　
增强型 DAB 显色试剂盒是一种借助辣根过氧化物酶(HRP) ，用于免疫组化显色、原位杂交显色或 Western、 Southern 、Northern、EMSA 等膜显色的试剂盒。 DAB（）是辣根过氧化物酶的常用底物。在 辣根过氧化物酶的催化下，DAB 会产生棕色沉淀。该棕色沉淀不溶于水和乙醇。 本产品采用特殊配方，灵敏度高，背景低，重复性好，储存稳定，使用方便，适合于蛋白印迹、免疫组织 化学和免疫细胞化学、斑点印迹和生物芯片等的染色和显色反应。　
操作说明：　
1. 对于组织切片或蛋白质印记膜，在与辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗体或其它形式的探针孵育后，用适 当洗涤液洗涤 3-5 次，每次 3-5 分钟。　
2. 向 5 ml 蒸馏水中加入 250 μl 溶液 A、250 μl 溶液 B、250 μl 溶液 C，并混合均匀，即为 DAB 工作液，1h 内使用。注意：溶液 A/B/C 必须完全融化后使用。　
3. 向组织切片或膜上加入适量 DAB 工作液，确保能充分覆盖样品。　
4. 室温避光孵育 1-30 分钟，显色时间过长可引起本底增高，故应密切观察显色过程（一般 3-10 分钟最理想）， 并在本底较浅且达到适当显色强度时以流水漂洗终止显色反应。　
5. 对于组织切片或细胞样品，显色反应终止后可对其进行其他染料复染。对于膜，显色反应终止后，可以室 温晾干避光保存。
注意事项： 
 1、不同细胞或组织样品所需的固定时间有所不同，应当根据细胞或组织的种类以及组织块的大小来调整固定时间。
 2、虽然作用温和，但能硬化组织，固定时间过久会导致组织变脆，切片时易碎。因此固定时间通常不宜超过 24 小时。
 3、醛基与抗原蛋白的氨基交联形成羧甲基，使抗原决定簇的三维构象出现空间障碍。分子间交联形成的网格结构可能部分或 完全掩盖某些抗原决定簇，使之不能充分暴露，可造成假阴性的染色，影响免疫组化结果。因此，4%固定的细胞或组织样品在进行免疫组化检测时，有时需要对抗原先进行修复，然后才能进行免疫染色等后续操作。
 4、本产品对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
 5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作
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CCDA添加剂 2ml*5支 每支添加于200mlCCDA基础中
操作步骤：
根据使用量，取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF，使 PMSF 的zui终浓度为 1mM。混匀备用（PMSF 现用现加）。
1、样品前处理：
a)对于贴壁细胞：去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照 6 孔板每孔细胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。
b)对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液，再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成 50-100 万细胞/管，然后再裂解。
c)对于组织样品： 把组织剪切成细小的碎片。按照每 20mg 组织加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量)。用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
2、后处理：
将裂解后的样品 10000-14000g 离心 3-5 分钟，取上清，即可进行后续的蛋白浓度测定、SDS-PAGE、Western blotting 和免疫沉淀等操作。
温馨提示：
    工作液与浓缩液选择的技巧，以及各自的优势。
1，工作液的优势：工作液操作方便，降低实验操作步骤，对于要求无菌的实验，降低染菌风险。
2，浓缩液的优势：浓缩液成本相对较低，实验范围更广，对于不要求无菌的实验，可以进行多种浓度的实验分析以及比较。而且由于浓度高，保存更加稳定。