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- 2025年10月31日
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60
- 英文名：
BCIP/NBT Alkaline Phosphatase Color Development Kit
- 保质期：
有效期一年
- 供应商：
上海莼试
- 保存条件：
4℃
- 规格：
共100ml
英文名称：BCIP/NBT Alkaline Phosphatase Color Development Kit
产品规格：共100ml
发货周期：1～3天
BCIP/NBT 碱性磷酸酯酶显色试剂盒是一种用于免疫组化显色、Western 等膜显色和诱导多功能干细胞iPS 鉴定等的试剂盒。
BCIP/NBT 是碱性磷酸酯酶的常用底物。在碱性磷酸酯酶的催化下，BCIP 会被水解产生强反应性的产物，该产物会和NBT 发生反应，形成不溶性的深蓝色至蓝紫色的NBT-formazan。
本试剂盒可以用于细胞或组织的碱性磷酸酯酶显色包括诱导多功能干细胞iPS 的鉴定，也可以用于Western 等结合有碱性磷酸酯酶的膜的显色检测。同时也可以用于细胞或组织内源性的碱性磷酸酯酶显色。
组份规格：
试剂A：碱性磷酸酯酶显色缓冲液 100ml
试剂B：BCIP 溶液(300X) 350μl
试剂C：NBT 溶液(150X) 700μl
使用说明
1. 对于组织切片或细胞样品或膜，在与碱性磷酸酯酶标记的抗体或其它形式的探针孵育后，用适当洗涤液洗涤3-5 次，每次3-5 分钟。对于检测内源性碱性磷酸酯酶的组织或细胞样品，在适当固定后，也用适当洗涤液洗涤3-5 次，每次3-5 分钟。
2. 按照如下比例依次加入各溶液，混匀后即配制成BCIP/NBT 染色工作液，配方如下：试剂A：碱性磷酸酯酶显色缓冲液 3mL试剂B：BCIP 溶液(300X) 10μL试剂C：NBT 溶液(150X) 20μL染色工作液总体积：3.03mL
3. 最后一次洗涤完毕后，去除洗涤液，加入适量BCIP/NBT 染色工作液，确保能充分覆盖样品。
4. 室温避光孵育5-30 分钟或更长时间(可长达24 小时)，直至显色至预期深浅。
5. 去除BCIP/NBT 染色工作液，用蒸馏水洗涤1-2 次即可终止显色反应。
6. 对于组织切片或细胞样品，显色反应终止后，如有必要可以用中性红染色液(neutral red staining solution)染色，以便于观察。对于膜，显色反应终止后，可以室温晾干避光保存。
储存：4℃，有效期一年。
细胞生物学研究有以下几个方面。
细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括。
①细胞核、染色体以及基因表达的研究。
②生物膜与细胞器的研究。
③细胞骨架体系的研究。
④细胞增殖及其调控。
⑤细胞分化及其调控。
⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡)。
⑦细胞的起源与进化。
⑧细胞工程。
注意事项：
BCIP/NBT碱性磷酸酯酶显色试剂盒尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
需自备PBS。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
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文献和实验检测方法 对于探针和靶序列杂交之后的检测，我们通常使用碱性磷酸酶（AP）耦联的抗体，采用显色法或化学发光法检测。在碱性磷酸酶的底物中，我们使用CDP-Star或CSPD用于化学发光法检测，NBT/BCIP用于显色法检测。同时，对于膜杂交中的化学发光信号的检测，建议使用Lumi-Film以获得最理想的信号。 检测底物 即用型CDP
一般 沉淀颜色 紫色 蓝紫色 蓝紫色 棕红色 用途 AP显色 AP或者葡糖氧化酶 WB、原位杂交和免疫组化 AP和免疫组化 四种常用AP显色方法的比较 上表列举了常用的AP显色方法比较，包括BCIP（5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸盐）、NBT（四唑硝基蓝）和INT（硝基四紫唑），以及它们之间的组合使用。其中，BCIP/NBT是碱性磷酸酶的最佳底物组合之一，具有灵敏度最高、显色锐利、成像性能好等特点，是最常
漂洗10～30min。 （12）2×SSC（含20μg/mlRNaseA, 适于RNA探针）冲洗30min，37℃。 （13）1×SSC，0.1×SSC,37℃各漂洗10～30min。 （14）0.05mol/l PBS 冲洗4×5min。 （15）3%BSA（0.4%Triton X-100 PBS配）37℃保温30min。 （16）Avidin �AKP(碱性磷酸酶)（1：500～1：100，0.4%Triton X-100 PBS配）室温1～3h
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