Float-A-Lyzer G2, CE, 1000 kD,

LABELING GIZZARD MYOSIN WITH IATR (MHC AND 17KD MLC)

collect supernatant.Dilute 100 to 1000 fold and read OD at 555 nm.The volume required for reaction (in ml)is calculated as:(1.4/OD555)x mg of myosin 10.Add dye to myosin,mix gently by pipeting.Incubate on ice for 2 hr in the dark.Equilibrate column

干货：小分子量蛋白（11KD）WB实验艰辛历程及经验总结

不固定随意吧，假如你的蛋白分子量很小，也许5KD以下？那么固定一下也未尝不可。10、抗原抗体反应很灵敏，我的抗体在免疫荧光上面已经验证过的，所以敷抗体的过程没什么说的。不过抗体稀释比例的话，我是习惯提高浓度的，说明书1：1000，我就1：500。这个没有依据，纯癖好，也是师兄们教的。。。11、显影这一步我觉得也有可说的。我试过多次，发现我的这个蛋白第一遍滴加显影液后条带不会很清晰，然后你可以把条带拿出来就放一边让它反应一会，然后再放回机器里面，重新滴加显影液显影，效果就会好不少。还有显影时间，结合

RUVKUN Antibody Staining Protocol revised 10/29/90

  RUVKUN Antibody Staining Protocol revised 10/29/90 Fixation: 1. C. elegans N2 grown in liquid or plates. Harvest worms. Wash for 2 hours at room temp. in 1X M9 or PBS. 2. Fix in 5 ml of FRESH THAT DAY 1% paraformaldehyde: