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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
51
- 英文名:
详见说明书
- 保质期:
有效期一年
- 供应商:
上海莼试
- 保存条件:
-20℃避光保存
- 规格:
详见说明书
Caspase3/7活细胞荧光实时法检测试剂盒尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响,但为取得良好的使用效果,3-6个月内推荐4℃保存,并适当注意避免反复冻融。
如果有细菌或真菌污染,会严重影响检测效果。
染色后宜尽快检测,时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
如果细胞收集过程中使用了胰酶,需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC,导致染色失败。
荧光物质均易发生淬灭,在进行荧光观察时,尽量缩短观察时间,同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
用于流式细胞仪检测时,如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞,并且通过调整相关设置和参数也无法改善,可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测,这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
需自备PBS。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
中文名称:Caspase3/7活细胞荧光实时法检测试剂盒
英文名称:
产品规格:100T|50T
发货周期:1~3天
凋亡早期的重要特征之一是半胱氨酸特异性蛋白酶——caspase家族蛋白的活性激活。这一类酶可以参与到一系列的生化反应中,响应凋亡早期信号并导致相应的蛋白底物剪切,继而引发细胞解体。目的底物可识别的序列包含天门冬氨酸残基,剪切发生在序列的羰基段。
Caspase3/7活细胞荧光实时法检测试剂盒采用新型的荧光底物为原料,可以检测凋亡细胞中激活的caspase3/7.这种具有膜亲和型的检测试剂盒由一个4氨基的小肽(DEVD)和一种核酸结合染料。凋亡发生时,caspase3/7蛋白被激活,从而剪切caspase3/7识别序列DEVD肽段。剪切底物后,游离的核酸染料与DNA结合,从而发出亮绿色荧光信号。
操作步骤
1.1 以合适的培养基悬浮细胞或贴壁细胞,加入合适的化合物或药物,刺激细胞诱导凋亡。
1.2 去除药物或化合物,以新鲜培养基洗涤细胞23次,更换新鲜培养基后,以1μL/mL的量加入caspase3/7检测液,使得caspase3/7检测试剂工作液浓度为1μM。(注意: Caspase3/7 检测试剂工作液浓度为0.5μM~2μM,您根据细胞量以及培养液的体积进行调整优化。)
1.3 37℃,避光孵育30min,或室温孵育4560min。
1.4 荧光显微镜观察拍照或荧光光度计读数。
细胞培养的优点:
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
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细胞生物学研究有以下几个方面。
细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括。
①细胞核、染色体以及基因表达的研究。
②生物膜与细胞器的研究。
③细胞骨架体系的研究。
④细胞增殖及其调控。
⑤细胞分化及其调控。
⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡)。
⑦细胞的起源与进化。
⑧细胞工程。
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文献和实验过程中,都会发生分子信标与扩增产物结合,从而产生荧光,但这并不影响PCR的整个过程。并且只有能和分子信标结合的DNA模板得到扩增时才能产生荧光信号。所以荧光强度与特异性扩增产物的量成正比,它是模板被PCR扩增的直接标志。与常规的核酸检测方法相比,分子信标可以进行闭管操作,有效消除核酸的交叉污染,具有实时、定量、高灵敏度、高特异性等特点。 4.2 用于活体内核酸的动态检测 通过将分子信标注入活细胞内,使分子信标与特定的模板结合产生荧光。可以通过荧光显微镜实时、动态的检测整个过程。如可以用于细胞
波长590 nm进行荧光读取。最佳的读取可提供最大的动态范围、最佳的线性度以及最小的标准偏差。 3.对数据进行作图。 细胞增殖检测 用MTT细胞生长检测试剂盒(CT01)检测增殖情况,用AldeRed ALDH检测试剂盒(SCR150)分析醛脱氢酶 (ALDH)表达情况。 肿瘤干细胞表达醛脱氢酶(ALDH)水平升高。AldeRed™ ALDH检测试剂盒可使用ALDH红移荧光底物基于醛脱氢酶(ALDH)表达进行活肿瘤干细胞鉴定和分离,允许同时使用包括GFP细胞系在内的绿色荧光报告物。 1.
性极佳的低光探测及活细胞荧光定量分析。利用这一功能既可对单个细胞或细胞群的溶酶体,线粒体、DNA、RNA和受体分子含量、成份及分布进行定性及定量测定,还可测定诸如膜电位和配体结合等生化反应程度。此外,还适用于高灵敏度快速的免疫荧光测定,这种定量可以准确监测抗原表达,细胞结合和杀伤及定量的形态学特性,以揭示诸如肿瘤相关抗原表达的准确定位及定量信息。 3.2 定量共聚焦图像分析 借助于ACAS激光共焦系统,可以获得生物样品高反差、高分辨率、高灵敏度的二维图像。可得到完整活的或固定的细胞及组织的系列
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