2D冻存管扫码仪

RT-PCR 原理与实验技术

一、知识背景 1. 基因表达：DNA——RNA——Protein 单拷贝基因表达存在逐步放大机制，如一个蚕丝心蛋白基因——104 个丝心蛋白 mRNA（每个 mRNA 存活 4 d，可以合成 105 个丝心蛋白）——共合成 109 个丝心蛋白 。因此单拷贝基因的 mRNA 表达水平对于其功能水平的调控是非常重要的。 2. PCR 技术（Polymerase chain reaction）： 即聚合酶链式反应。在模板、引物和四种脱氧核苷酸存在的条件下依赖于 DNA 聚合酶的酶促反应，其特异

胃癌三种细胞株（MGC-803、BGC-823、SGC-7901）的培养

含10%FBS的RPMI-1640培养液6ml,吹打混匀, 视细胞密度以1:2或1:3分瓶培养,当细胞长满培养瓶且形成致密单层时即可再传代。2） 细胞冻存：A取在培养瓶内已经生长2－3天形成单层的细胞，最好在冻存前一天换液，以保证细胞处于良好的营养状态。B 用胰蛋白酶消化细胞，计数，1000 rpm/分钟，离心10分钟。C 弃去上清，用配好的冻存培养基重新悬浮细胞并配成浓度为106 细胞/ ml的细胞悬液。D 用吸管轻轻吹打使细胞均匀，按1 ml的量分装入无菌冻存管内。E 然后将标记好的冻存管

细胞培养的操作步骤

的缓冲液再清洗一次。 2. 消化分离　消化分离的目的是将细小的组织块消化分离成细胞团或分散的单个细胞，以利于进一步的培养，常用的消化酶有胰蛋白酶和胶原酶。 3. 培养　细胞悬液用计数板进行细胞计数。用培养液将细胞数调整为（2～5）×105 cells／ml，或实验所需密度，分装于培养瓶中，使细胞悬液的量以覆盖后略高于培养瓶底部为宜。置CO2培养箱内，5％CO2，37℃静置培养。一般3～5d，原代培养细胞可以黏附于瓶壁，并伸展开始生长，可补加原培养液量1／2的新培养液，继续培养2～3d后换液