EW设计PCR12联管；0.2ml；平盖；白色

甲基化检测方法（亚硫酸氢盐修饰后测序法）

3）由于该试剂盒中仅配备针筒没有针栓，如果有真空负压吸引器，使用起来很方便；如果没有，需要自备3ml-5ml注射器。将注射器针筒与试剂盒提供的回收小柱紧密连接后，将上述混合物用移液器移至针筒内，用2ml以上的EP管放置小柱下接收废液。加针栓，轻轻加压，将液体挤出，此时可见小柱内有白色的树脂沉积。 4）将注射器与小柱分离后拔出针栓，再将针筒与小柱连接，向针筒内加入2ml 80％的异丙醇，插入针栓，轻轻加压，将异丙醇挤出。此为洗涤步骤。 5）将注射器与小柱分离，将小柱置于洁净1.5ml洁净EP管上，离心

目的基因片段的PCR扩增与克隆

中，当引物－模板与DNA聚合酶达到一定比值时，DNA聚合酶催化反应趋于饱和，即PCR反应不再增加。平台效应在PCR反应中是不可避免的，但一般在平台效应出现前，PCR产物的数量足以满足实验的需要。（2）PCR反应条件的优化PCR方法操作简便，但影响因素颇多，因此需要根据不同的DNA模板，摸索最适条件。主要从：反应的特异性、敏感性、真实性、扩增效率等四个方面衡量PCR反应的结果。①循环参数 变性 退火 延伸②PCR反应成分（3）PCR反应引物的设计引物的设计在整个PCR扩增中占有十分重要的地位。①

常用分子生物学实验方法

第一章 基因克隆 1. 操作流程 收集基因信息——>设计引物——>PCR ——>回收目的片段——>与载体 连接，取得连接产物 ——> 用感受态细胞做转化 ——>接菌——>阳性克隆鉴 定(酶切法或PCR)——>质粒抽提——>质粒测序——>测序结果分析——>克隆 信息输入数据库——>质粒实物保存2. 方法 2.1 设计引物 引物设计要求：引物长度为25bp-35bp.forward primer 和reverse primer 的Tm 为70℃(±4℃