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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
43
- 英文名:
详见说明书
- CAS号:
详见说明书
- 保质期:
一年
- 供应商:
上海一研
- 保存条件:
4°C保存
- 规格:
100T/盒
5×Equilibration Buffer————750μl
FITC-12-dUTP Labeling Mix———100 μl
Recombinant TdT Enzyme—————20 μl
Proteinase K (2 mg/ml)————40 μl
DNase I (1 U/μl)———————5μl
10×DNase I Buffer——————100 μl
参数规格:
产品名称 α-PKC mRNA原位杂交试剂盒
规格:100T/盒
特异性: 大鼠
标记方式: 3’—尾段标记
保存条件: 4°C保存一年
试剂盒内容:
1.α-PKC寡核苷酸探针杂交液 2ml;
2.预杂交液 2ml;
3.胃蛋白酶(×10;Pepsin) 2ml;
4.封闭液 5ml;
5.生物素化鼠抗 5ml;
6.SABC-POD 5ml;
7.生物素化过氧化物酶 5ml。
操作程序:
注意:最重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
产品具有以下优点:
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灰葡萄孢 种属:BotrytiscinereaPersoon 模式菌株 no
温特曲霉 种属:AspergilluswentiiWehmer 模式菌株 no
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细黄链霉菌 种属:Streptomycesmicroflavus(Krainsky)WaksmanetHenrici 模式菌株 no
藤黄色链霉菌 种属:Streptomycesluteocolor 模式菌株 no
吸水链霉菌 种属:Streptomyceshygroscopicus(Jensen)WaksmanetHenrici 模式菌株 no
灰色链霉菌 种属:Streptomycesgriseus(Krainsky)WaksmanetHenrici 模式菌株 no
α-PKC mRNA原位杂交试剂盒英文名称:Idiomarina homiensis
中文名称霍米海角海源菌
存储人:Kwon et al.
来源历史:
<< DSMZ (Pseudidiomarina homiensis) << S. W. Kwon, PO-M2 << H. Y. Weon et al.
其他保藏中心编号:DSM 17923; CIP 109781; KACC 11514
分离来源:海沙
菌种特性
备注:
培养条件:28°C
生物安全等级:1
氧气需求:需氧
培养基:TSB培养基:61
MARINE AGAR 2216 (DIFCO 0979)
Peptone 5.0 g
Yeast extract 1.0 g
Ferric citrate 0.1 g
MgCl2 8.8 g
Na2SO4 3.24 g
NaHCO3 0.16 g
KBr 80.0 mg
SrCl2 34.0 mg
H3BO3 22.0 mg
NH4NO3 1.6 mg
Na2HPO4 8.0 mg
Agar 15.0 g
Distilled water 1.0 L
NaCl 19.45 g
CaCl2 1.8 g
KCl 0.55 g
Na2SiO3 4.0 mg
NaF 2.4 mg
Adjust pH to 7.6.
模式菌株:是
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文献和实验测磷酸化水平 mengcb 还可以用PKC的 报告质粒检测FRET变化啊,也很经典的 bianbenjamin 放射性受体配体结合试验也是一个非常灵敏的测定PKC转位的方法,只是需要同位素标记的佛波酯,还是买的到的。我有这样一篇文献,需要的话上传给你。不过还是没有解决你的问题,你问的的确很深了,我也非常感兴趣这个问题,期待高人回答。 zhidanguilai 加拿大Immunechem公司的非放射性蛋白激酶C活性分析试剂盒
licanming 请问有无人用过assaydesigns公司的PKC Kinase Activity Assay Kit(cat NO:EKS-420A)?可否说一下应用的经验?注意事项等?还有,该试剂盒的说明书有几处地方不是很懂,请大家帮忙看一下: 1、To avoid cross contamination, change disposable pipette tips between the addition of each standard
三七家园 呵呵,希望大侠们,大牛们,前辈们不吝赐教。。。。:P licanming 可以讲具体一点吗? 三七家园 谢谢楼上的关心,我现在要检测pkc三个亚基δ,ε,ζ在用0.2uM的PMA(pkc的激动剂)后如何被激活?(是被磷酸化呢?还是蛋白量表达增加?或者别的什么?)怎样检测这种激活?(如果是前两个,我想用western blot因为我现在只会这个技术) ffyy
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