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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
50
- 英文名:
0.01mol/L, pH6.0
- 保质期:
24 个月
- 供应商:
上海信裕生物科技有限公司
- 保存条件:
室温密封保存,有效期至少 24 个月。
- 规格:
1L(干粉);2L(干粉)
产品简介
细胞或组织用、甲醛或其它醛类试剂固定后,会导致细胞内抗原形成醛键、羧甲键而被封闭了部 分抗原决定簇,同时蛋白之间发生交联而使抗原决定簇隐蔽,导致免疫染色时染色信号减弱,甚至出现一些假 阴性染色结果。所以要求在进行免疫组化染色时,需要先进行抗原修复或暴露,即将固定时分子之间所形成的 交联破坏,而恢复抗原的原有空间形态。从而提高抗原的检出率,降低背景染色,提高检测的准确性。
柠檬酸钠缓冲液 0.01mol/L, pH6.0 是一种常用的抗原修复液,可以用于石蜡切片、冰冻切片等样品使用 、甲醛或其它醛类试剂固定后的抗原修复。可以有效去除醛类固定试剂导致的蛋白之间的交联充分 暴露石蜡切片等样品中的抗原表位,从而大大改善免疫染色效果。 通常石蜡切片都需进行抗原修复处理,而冰冻切片可以不进行抗原修复处理。抗原修复可以提高石蜡切片 的免疫染色效果,亦可以不同程度的提高冰冻切片的染色效果。当冰冻切片免疫染色效果不理想时,考虑进行 抗原修复。
按照每个片子需要 10ml 抗原修复液计算,1L 抗原修复液可以用于 100 个样本的抗原修复。
使用参考
本产品是干粉形式,使用前用去离子水或蒸馏水按产品规格溶解至 1L 或 2L,即可使用。
1. 对于石蜡切片:
a. 脱蜡:二甲苯 3 次,每次 3-5min→ 无水乙醇 2 次,每次 3-5min→ 95%乙醇 1 次,3-5min→ 90%乙醇 1 次,3-5min→ 75%乙醇 1 次,3-5min→ 蒸馏水洗 2 次,每次 3-5min。
b. 抗原修复:将切片浸泡在柠檬酸修复液中,95-100℃加热约 15 min (加热时间可以控制在 10-20 min 内, 最佳的加热时间需根据不同的样品和目的蛋白自行摸索)。柠檬酸修复液使用前需预热到 95-100℃。加热可以使 用普通的水浴锅,也可以使用微波炉加热。如果使用微波炉加热,需注意避免暴沸和过多的水分蒸发。随后大 约在 20-30 min 内冷却至室温。用免疫染色洗涤液洗涤 1-2 次,每次 3-5 min。随后即可进行封闭等后续的免疫 染色步骤。
2. 对于冰冻切片: 用免疫染色洗涤液洗涤切片 5 min。将切片浸泡在柠檬酸修复液中,95-100℃加热约 15 min (加热时间可以 控制在 10-20 min 内,最佳的加热时间需根据不同的样品和目的蛋白自行摸索)。柠檬酸修复液使用前需预热到 95-100℃。加热可以使用普通的水浴锅,也可以使用微波炉加热。如果使用微波炉加热,需注意避免暴沸和过 多的水分蒸发。随后大约在 20-30 min 内冷却至室温。用免疫染色洗涤液洗涤 1-2 次,每次 3-5 min。随后即可 进行封闭等后续的免疫染色步骤。
3. 对于其它样品的抗原修复,可以参考石蜡切片或冰冻切片的步骤进行。
注意事项
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴手套操作。
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文献和实验、封片、镜检。 三、常用抗原修复方法 用于福尔马林固定的石蜡包埋组织切片:1、抗原热修复 可根据实验室的具体条件,选用微波炉抗原修复、高压锅抗原修复或水浴高温抗原修复。抗原热修复可选用各种缓冲液,如 TBS、PBS、重金属盐溶液等,但实验证明,以 0.01M 枸橼酸盐缓冲液(pH6.0)效果最好。请选用我公司提供的 ZLI-9064 枸橼酸盐缓冲液(粉剂)配制,取该粉剂一包溶于1000ml 的蒸馏水中,混匀,其 pH 值在 6.0 ± 0.1,如因蒸馏水本身造成的 pH 值偏差,请自行调整
1)PBS缓冲液(pH7.2~7.4):NaCl 137mmol/L,KCl 2.7mmol/L,Na2HPO4 4.3mmol/L, KH2PO4 1.4mmol/L。2)0.01mol/L柠檬酸盐缓冲液(CB,pH6.0,1000ml):柠檬酸三钠 3g,柠檬酸 0.4g。3)0.5mol/L EDTA缓冲液(pH8.0):700ml水中溶解186.1gEDTA·2H2O,用10 mmol/L NaOH调至pH8.0,加水至1000ml。4)1mol/L的TBS缓冲液(pH8.0):在800ml水中
溶液。 X-磷酸盐:50mg/ml,溶于二甲基甲酰胺的5-溴-4氯-3-吲哚磷酸盐。 封阻试剂:粉剂 0.2 mol/L EDTA,pH 8.0(20℃) 4mol/L LiCl 70%乙醇 10%(V/V)N-十二烷基肌氨酸钠盐. 10% SDS 20 × SSC 杂交溶液:5×SSC;0.l%(W/V)封阻试剂;0.02%(W/V)SDS。 缓冲液Ⅰ:100 mmol/L Tris-CI;150mmol/L NaCl,PH7.5(20℃)。 缓冲液Ⅱ:0.5 %(W/V)封阻
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