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- 信裕生物
- XY0421
- 中国
- 2025年07月10日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商：
上海信裕生物科技有限公司
- 库存：
50
- 克隆性：
多克隆
- 保质期：
1年
- 保存条件：
4℃避光保存，至少一年有效。
- 规格：
100mL；500mL
产品简介
TMB，即3, 3′,5 ,5′-Tetramethylbenzidine，是辣根过氧化物酶的常用底物。在辣根过氧化物酶或其他适当过氧化物酶的催化下，TMB 会产生可溶性蓝色产物。蓝色产物通常可以在 370nm 或 620-650nm 测定吸光度。加入硫酸后，溶液呈黄色，此时可以在 450nm测定吸光度。本试剂盒常用于 ELISA 检测，也可以用于检测血液或血红蛋白等样品中的过氧化物酶含量。用于 ELISA 检测时，每个样品通常使用 0.2 毫升显色液。
本显色剂采用最新的显色技术，把所有的相关试剂全部配制在单一溶液中，仅由单一溶液组成，简化了操作步骤，使检测更加稳定可靠。
特点：
方便：单一溶液，直接使用
灵敏：独特的配方,显色时间短
安全：不含任何有机溶剂，也无需用有机溶剂稀释
稳定：4℃避光保存至少1年有效。
使用说明
1. 根据参考ELISA 试剂盒的实验步骤，在与辣根过氧化物酶标记的抗体孵育后，用适当洗涤液洗涤3-5次，每次3-5分钟。
2. 经HRP标记物孵育并充分洗涤后，酶标板每孔加入 200ul TMB 显色液。
3. 室温避光孵育 3-30 分钟或更长时间(可长达 24 小时)，直至显色至预期深浅。
4. 加入50 微升2M H2SO4 终止反应，随后在 450nm测定吸光度。
常见问题
1. 背景显色太深。
如果背景(没有样品的对照孔)显色太深，一方面需考虑使用适当的封闭液进行封闭，另一方面可以考虑缩短显色时间，或降低二抗浓度。另外，选择适当强度的洗涤液，或延长洗涤时间也会有所帮助。
2. 没有显色或显色太弱。
a. 适当提高一抗或二抗的浓度。检测二抗效果，滴一滴稀释二抗在离心管内，检测二抗是否可以被正常显色。
b. 可以考虑使用更加灵敏的放大检测体系，例如使用生物素检测体系。
c. 可以适当延长显色时间。
注意事项
1）TMB 对人体有刺激性，请注意适当防护。
2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验显色（HRP酶） 1．增强化学发光法(ECL) Ecl 显色原理：氨基苯二酰肼类主要是鲁米诺及异鲁米诺衍生物，是最常用的一类化学发光剂。鲁米诺（luminol，5＇-氨基-2，3-二氢-1，4-酞嗪二酮）的分子结构及化学反应式如下： 鲁米诺在免疫测定中既可用作标记物，也可用作过氧化物酶的底物。在Ecl底物中，含有H2O2和鲁米诺，在HRP（辣根过氧化物酶）的作用下，发出荧光来。 试验步骤： 1）将两种显色底物1：1等体积混合（一般各1ml/membrane）。
底物范围较广，包括二氨基联苯胺 (DAB)、氯萘酚和氨乙基咔唑等。 二氨基联苯胺/金属盐 DAB 是辣根过氧化物酶最敏感、常用的底物。它产生强烈的棕色产物，在水和醇中不溶解。多数情况下，推荐在 DAB 中加入不同的金属离子。当加入金属盐如钴、镍至底物液中，辣根过氧化物酶可以更加敏感。此类反应产物呈暗蓝灰色至黑色，且在水及醇中稳定。DAB/金属盐染色应用的组织染色范围较广。 1. 需要的溶液和特殊设备 DAB，0.05 mol/L Tris 缓冲液 (pH7.6), 0.3％ (W
问：有没有做辣根过氧化物标记的朋友啊，能不能把你们的步骤发给我。本人开始做，发现很多人用的浓度都不一样。答：1.1 试剂准备1) 10mg/mL HRP2) 0.06mol/L NaIO43) 0.16mol/L乙二醇4) 碳酸盐缓冲液(Na2CO3 0.7952g NaHCO3 1.4702g 溶于500mL蒸馏水中，调pH值到9.5)5) 2.5mg/mL NaBH46) 0.01mol/L磷酸盐缓冲液，pH7.41.2 操作步骤1. 10mg/mL取HRP VmL，溶液为棕黄色，加入
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