牛脾脏中性粒细胞分离液试剂盒

各种动物脾脏中性粒细胞分离液试剂盒 规格：200 mL/kit 保存：本产品对光敏感，应该室温避光储存，保质期 2 年。无菌开封后，保存于室温。 试剂盒组成： 试剂A 200mL 试剂C 100mL 细胞洗涤液 200mL 全血及组织稀释液 200mL 红细胞裂解液 100mL 操作步骤： 1. 制备脾脏的单细胞悬液。 2. 细胞悬液体积小于5mL时，在离心管中先加入4mL试剂A，后将2mL试剂C小心叠加于试剂A之上，形成梯度界面（细胞悬液体积大于等于5mL，试剂A与试剂C比例2：1，试剂总量与稀释后的样本量相等。但二者的总体积不能超过离心管的三分之二，否则会影响分离效果），将细胞悬液平铺到分离液液面上方，注意保持两液面界面清晰。（可以使用巴氏德吸管吸取细胞悬液，然后将细胞悬液小心的平铺于分离液上，因为两者的密度差异，将形成明显的分层界面。如果样品较多，加样的时间较长，在离心之前出现红细胞成团下沉属正常现象。） 3. 室温，水平转子500~1000g，离心20~30min（细胞悬液的体积越大所需的离心力越大，离心时间越长，最佳的分离条件需摸索，离心转速最大不超过1200g）。 4. 离心后，离心管中将出现两层环状乳白色细胞层，上层细胞为单个核细胞层，下层细胞为中性粒细胞层，如图所示（个体差异或者是分离条件不同，粒细胞层可分离不明显）。 5. 用吸管小心吸取试剂C与试剂A之间以及试剂A中的中性粒细胞到15mL洁净的离心管中，10mL PBS或细胞洗涤液洗涤细胞。250g，离心10min（如有红细胞混杂则加入适量红细胞裂解液）。 6. 弃上清，5mL的PBS或细胞清洗液重悬细胞，250g，离心10min。 7. 重复步骤6 8. 弃上清，细胞重悬备用。 脾脏单细胞悬液的制备方法 脾脏研磨的方法： 1. 无菌条件下摘取脾脏，撕去脾脏被膜，用眼科剪将脾脏剪成小块。 2. 将尼龙筛网或者是细胞过滤筛放置于平皿上，加入少量全血及组织稀释液（保证脾脏及获得的细胞处于液体环境中）。 3. 将脾脏放置于筛网上，使用注射器活塞或者是无菌镊子来研磨脾脏（尽量控制研磨力度，保持稀释液筛网悬空，避免在皿底上直接研磨而造成大批细胞死亡） 4. 研磨完全后使用全血及组织稀释液冲洗筛网，收集细胞悬液，再经滤网过滤。 注： A. 可用酶消化法，使用胶原酶对脾脏组织进行消化，得到单细胞悬液。 B. 如果最终得到的细胞需要培养，那全过程所需试剂与器材均要求无菌。 C. 根据脾脏的体积控制单细胞悬液的浓度在108~109个/mL。 注意事项： A. 开封前颠倒混匀，本分离液为无菌产品，为延长分离液保存时间，请在无菌条件下启封，避免微生物污染。。 B. 分离液使用时应始终保持室温（18℃~25℃），如室内温度较低，可将分离液预热。4℃或者是温度较低的条件下离心，可能会导致白膜层中红细胞污染加重。 C. 洗涤细胞，不可使用含Ca、Mg离子的缓冲液及培养液，其成分会导致血细胞凝集，大大降低细胞得率及纯度。 D. 部分塑料制品（如聚苯乙烯）因其带有的静电作用，可能会导致细胞挂壁，影响分离效果。 E. 如果要进一步对分离的细胞进行培养，那在收集血液和分离过程中，注意无菌操作，避免微生物污染。 F. 不同动物血液在不同比重分离液中的细胞离散系数及细胞带电不同，用户在制定分离液时应提供所需分离液的比重、动物种属及被分离细胞的名称。 相关产品： R1018 细胞洗涤液 S9020 优级胎牛血清 R1017 全血及组织稀释液 31800 RPMI Medium 1640 T1300 胰蛋白酶－EDTA消化液(0.25%)不含酚红 YA0902 一次性巴氏德吸管 各种其他动物及其他细胞的分离液及试剂盒