NATE™是InvivoGen设计的一种核酸转染增强剂,可以提高难转染细胞的瞬转与稳转效率,尤其适合人的单核细胞与小鼠巨噬细胞等难转染的细胞,如外周血单核细胞(THP-1)和小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW 264.7),且只需在平时加转染试剂操作前30min加入NATE™即可。值得注意的是,NATE对细胞温和,不会对细胞培养产生任何进一步的毒性。
在真核细胞转染过程中,外源性核酸(如质粒)的主要障碍是会被胞质传感器检测,如cGAS/STING、AIM2炎性小体和LC3介导的自噬。这些防御信号级联的激活常常会降低转染率和细胞存活率,特别是在难以转染的细胞(如免疫细胞)中会更明显。当使用NATE™时,这些核酸传感通路将被抑制,从而在转染过程中保护质粒并促进其表达。
产品特色:
与常用转染试剂 (e.g. GeneXPlus, Lipofectamine® LTX, and jetPRIME®) 及物理方法兼容。
更高的转染率,也适用于大质粒 (> 10kb)。
在所有的转染测试方案中都显示对细胞温和,没有毒性。
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产品信息:
Product Name |
Unit Size |
Cat. code |
NATE™ |
1 mL (100 reactions) |
lyec-nate |
应用举例
利用GeneXPlus将GFP标记的质粒(3kb)瞬时转染到THP-1细胞中,48小时后,荧光显微镜下观察,使用NATE™后转染效率明显增加。
利用GeneXPlus、Lipofectamine LTX、jetPRIME、nucleofection等常用转染方法,将~3kb质粒(左)和~8kb质粒(右)瞬时转染至THP-1细胞。48小时后,用流式细胞术检测转染效率,与不使用NATE™转染相比,数据有明显差异变化。
详细说明
在真核细胞转染过程中,“外来”核酸(如质粒DNA)的主要障碍是它们自身被胞质核酸传感器检测到,如黑色素瘤缺乏因子2 (AIM2)和环GMP-AMP合成酶(cGAS)介导的自噬。
AIM2是一种细胞质传感器,与双链DNA (dsDNA)结合后,会形成一种称为炎性小体的蛋白质复合物。最终,促炎症细胞因子IL-1β和IL-18的成熟需要通过相应的AIM2 炎症小体的形成和半胱天冬氨酸蛋白水解酶1(caspase-1)的活化来完成。这些细胞因子的产生不利于转染成功。
cGAS能识别dsDNA,并通过STING/TBK1/IRF3信号轴诱导I型干扰素(IFNs)的产生,以及一些干扰素刺激基因(ISGs)的表达,这些强大的效应功能,在转染中是非常多余的。
此外,STING的激活不依赖于TBK1-和INF,就可以导致LC3相关的自噬。最终,自噬体将形成包含“外来”核酸(如质粒)的形式,并与溶酶体融合在细胞中降解。
参考文献:
Gao P,
Wang L,
Yang N,et al. 2020.Peroxisome proliferator-activated receptor gamma (PPARγ) activation and metabolism disturbance induced by bisphenol A and its replacement analog bisphenol S using in vitro macrophages and in vivo mouse models.Environ Int 134:105328.
关于Invivogen
Invivogen公司是一家基因治疗相关的分子生物学试剂公司,公司3210年在美国加州生物公司聚集地圣地亚哥成立,初期即以其拳头产品支原体抗生素与同城Invitrogen公司合作进行全球市场推广。其主打产品有:多基因表达质粒载体、DNA疫苗质粒载体、鼠类转基因质粒载体、合成基因质粒载体pMOD、腺病毒载体AdenoVec、基因转染试剂和一些非常具有特色的试剂盒,此外该公司还拥有很大的基因和启动子库,可以接受客户的定制服务,极大地方便了客户。
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