Vomicine番木鳖次碱,125-15-5

蛋白质印迹（Western blot）实验方案

（十二烷基硫酸钠）50 mM Tris-HCl pH 8.0蛋白酶抑制剂Tris-HCl 缓冲液20 mM Tris-HCl pH 7.5蛋白酶抑制剂●电泳、转膜、封闭缓冲液Laemmli 2× 缓冲液/上样缓冲液4% SDS10% 2-巯基乙醇20% 甘油0.004% 溴酚蓝0.125 M Tris-HCl测定 pH 并调节至 pH 6.8。电泳缓冲液（Tris-甘氨酸/SDS）25 mM Tris 碱190 mM 甘氨酸0.1% SDS测定 pH，pH 应为约 8.3。必要时进行调节。转膜

交联染色质免疫共沉淀（X-ChIP）实验设计

。加入甘氨酸可以消除甲醛使交联反应终止。1.1.准备两个长满细胞的150cm2的细胞培养皿（1*107-5*107 个细胞/皿）。将甲醛直接滴入PBS洗过的细胞培养皿中，使其终浓度为0.75%，然后在室温缓慢旋转10分钟，使蛋白和DNA发生交联。1.2 加入甘氨酸使其终浓度为125mM,在室温晃动孵育5分钟。1.3 使用10ml预冷PBS清洗细胞2次1.4 使用细胞刮将细胞收获放入 5ml 预冷PBS中，并转入50ml的管子。1.5.在皿里加入3mlPBS，将剩余的细胞转移到50ml管子里1000g

转膜实验原理与操作步骤

琼脂糖的质量，胶的浓度，厚度( 制样，点样：DNA 样品中指示剂量稍多。 电泳：一般 1-1.5V/cm 的电压，使DNA 迁移到适当距离，一般指示剂约移动 10-11cm ( 大电泳槽： 40V × 12-15hrs ，小电泳槽 30V × 4-5 hrs)。 2. 转膜前的准备： 依胶大小每块凝胶准备两张比胶稍大的滤纸( 11 × 12.5 cm )，两张用作盐桥的滤纸，一张与胶同样大小的尼龙膜( 10 × 10.5cm )，两个玻璃盘、两块