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文献和实验转化费时费力,且容易出错,效果不稳定。 克隆效率高 M13要用电转化方能获得高效克隆,而T7Select制备大文库则容易得多 常见问题与解答 Novagen的人cDNA预制文库是怎么制备的? Novagen的预制T7Select cDNA文库均以T7Select10-3b制备,材料是经Novagen的Straight A’s™ mRNA分离试剂盒两次纯化的mRNA。mRNA
Novagen的预制T7Select cDNA文库均以T7Select10-3b制备,材料是经 Novagen的Straight A’s™ mRNA分离试剂盒两次纯化的mRNA。mRNA最长达8 kb以上,经反转录,用Novagen的OrientExpress™ Random Primer cDNA Kit (带甲基化dCTP)克隆。原始库的重组子为>1 x107 pfu,文库的滴度最低为1 x 1010 pfu。所有文库仅经一次包装和扩增。 哪一种Novagen的T7噬菌体载体(T
原理】 1.DNA片段回收方法:DNA片段在适当浓度的琼脂糖凝胶中,通上一定电压进行电泳,不同大小的DNA分子由于迁移率的不同而分离开。切下带有所需DNA片段的凝胶,用冻融法、玻璃奶回收法或商品化胶回收试剂盒将目的片段回收纯化。 2.利用Taq酶能够在PCR产物的3’末端加上一个非模板依赖的A,而T载体是一种带有3’T突出端的载体,在连接酶作用下,可以把PCR产物插入到质粒载体的多克隆位点,可用于PCR产物的克隆和测序。
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