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- 2025年07月16日
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- 详细信息
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20
- 英文名：
SulfoLink Coupling Resin
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海谷研
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
5ml/25ml
| 产品名称 | SulfoLink Coupling Resin |
| 英文名称 | SulfoLink Coupling Resin |
| 规格 | 5ml/25ml |
别名:巯基蛋白琼脂糖偶联树脂 PabPur SulfoLink Beads
英文名称:SulfoLink Coupling Resin
SulfoLink Coupling Resin 是一类预活化树脂，可以通过与巯基或者氨基的反应实现抗原的固定化，进而对免疫血清中的抗体进行纯化。
纯化流程
SulfoLink Coupling Resin 针对巯基和氨基的偶联条件有所差异，对于含有巯基抗原偶联请参考1.1 流程，对于含有氨基抗原偶联请参考1.2 流程。
1.1 含巯基抗原的偶联流程
1.1.1 缓冲液准备
所用水和Buffer 在使用之前建议用0.22 μm 或0.45 μm 滤膜过滤。
偶联液：50 mMTris，5 mMEDTA-Na，pH 8.5
封闭液：50 mMTris，5 mMEDTA-Na，50 mML-半胱氨酸，pH 8.5
保护液：20 mM 磷酸盐缓冲液，20% 乙醇，pH 8.0
结合/洗杂液： 20 mM 磷酸盐缓冲液，pH 8.0
洗脱液：100 mM 甘氨酸，pH 2.5-3.0
中和液：1 M Tris-HCl， pH 8.5
1.1.2 抗原准备
抗原样品使用前务必确保其巯基处于还原状态（可以使用Ellman’s Reagent 检测自由巯基的含量）。如果巯基已经氧化，必须对抗原进行还原，一般推荐使用还原剂TCEP（Tris(2-carboxyethyl) phosphine），TCEP 溶液很稳定，可以选择性的、高效的打开抗原中的二硫键，并且不影响抗原与树脂的偶联反应，每毫克抗原中TCEP 的添加量不超过12mg，需要自己进行优化。如果使用DTT 等含有巯基的还原剂，处理完样品必须要将还原剂去除，否则会影响抗原与树脂的偶联效率。使用偶联液溶解抗原，制备成终浓度为1-3 mg/ml 的抗原溶液。建议该溶液现用现配，储存时间过长会影响偶联效果。
1.1.3 抗原偶联
1) 取适量的SulfoLink Coupling Resin，加入合适的重力柱中，靠重力流干保护液，用3倍柱体积的偶联液平衡树脂，待偶联液流干，再加入3 倍柱体积的偶联液，重复操作2遍。共使用9 倍柱体积的偶联液。
2) 关闭柱子的下端出口，加入等体积的含巯基的抗原，混匀，取出至于合适的离心管中，置于28℃震荡孵育30min。
注：确保树脂充分悬浮起来，否则将大大影响偶联效率。
3) 将上述反应体系取出，转移至重力柱中，流干其中溶液，并收集流出，再用3 倍柱体积的偶联液清洗树脂，合并两次流出。
注：如有需要，可以使用Ellman’s Reagent 检测其中巯基含量，得出抗原残留量，从而计算偶联效率。
4) 关闭柱子的下端出口，加入等体积的封闭液，混匀，转移至合适的离心管中，置于28℃震荡孵育30min。
5) 将上述反应体系取出，转移至重力柱中，流干其中的封闭液。
注：如果立即使用，可以参考1.1.4 操作。如果以后使用，可以用3 倍柱体积的结合液清洗树脂，然后保存在等体积的保护液中，于2℃-8℃保存。
1.1.4 抗体纯化
1) 将偶联了抗原的树脂装入合适的层析柱，用5 倍柱体积的结合液进行平衡，使填料处于与抗体更易结合环境中，一方面保护目标抗体，另一方面提高抗体结合效率。
2) 将含有抗体的样品加到平衡好树脂中，为了保证抗体与树脂充分接触，提高目标抗体的回收率，可以控制上样流速在0.5-1 ml/min，并收集流出液。
3) 用10-15 倍柱体积的洗杂液进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，提高目的抗体的纯度，收集洗杂液。
4) 使用5-10 倍柱体积的洗脱液，收集洗脱组分，即目的抗体。
注：为了保持抗体活性，需要立即将洗脱组分透析至pH 7.0-8.0 的缓冲液中，或者先加入1/10倍洗脱组分体积的中和液，将洗脱组分进行中和，再透析。
5) 依次使用3 倍柱体积的结合液和5 倍柱体积的去离子水平衡树脂，最后再用5 倍柱体积的保护液平衡，然后保存在等体积的保护液中，置于2℃-8℃保存，防止填料被细菌污染。
1.2 含氨基抗原偶联流程
1.2.1 缓冲液准备
所用水和Buffer 在使用之前建议用0.22 μm 或0.45 μm 滤膜过滤。
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250克BRTYGPN MediumTYGPN培养基
100毫升炭疽杆菌检测用配套试剂Indian ink印度墨水
500克炭疽杆菌检测用配套试剂Iodophor碘附
2毫升×10支添加于200ml CAMPY-CEFEX琼脂基础中Campy-Cefex SupplementCampy-Cefex添加剂
10毫升×6支多项目尿液化学分析控制品多项目尿液化学分析控制品
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实验操作步骤：
是用于测定细胞增殖或毒性实验中活细胞数目的一种高灵敏度，无放射性的比色检测法。CCK法应用非常广泛，如药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测等。下面以engreen的CCK8试剂盒为例，简要说明细胞增殖-毒性检测的操作步骤
方法/步骤
在96孔板中配制100μl的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养 24 小时 (在 37℃，5% CO2 的条件下)。
向培养板加入 10μl 不同浓度的待测物质。
将培养板在培养箱孵育一段适当的时间 (例如: 6,12, 24 或 48 小时)。
向每孔加入 10μl CCK8 溶液（engreen） (注意不要在孔中生成气泡，它们会影响 OD 值的读数)。
5. 将培养板在培养箱内孵育 1-4 小时。
用酶标仪测定在 450 nm 处的吸光度。
如果暂时不测定OD值，打算以后测定的话，可以向每孔中加10μl0.1 M HCl溶液或者1%wSDS 溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化 。
蛋白质与免疫功能：
蛋白质是机体免疫防御功能的物质基础，当蛋白质营养不良时，其有关组织器官的结构和功能均受到不同程度的影响。
（一）免疫器官
蛋白质热能营养不良明显影响胸腺及外周淋巴器官的正常结构。且这种损伤是不可逆的，一旦受损其结构和功能恢复极为缓慢。
（二）细胞免疫
蛋白质营养不良时主要影响T淋巴细胞的数量和功能，医学教|育网搜集整理外周血中T淋巴细胞总数显著减少，对抗原诱导的增殖反应降低。
（三）体液免疫
蛋白质营养不良时，上皮及粘膜组织分泌液中SIgA显著减少，溶菌酶水平下降，使其组织抵抗力降低，甚至可导致感染扩散。
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