大鼠成骨细胞培养

细胞的种类：
第一种：
是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
以下是产品信息的认购信息：
产品名称： 大鼠成骨细胞培养
商品货号： EY-Z6781
中文名称： 大鼠成骨细胞
种属来源：大鼠
组织来源：骨
细胞形态：上皮样
生长特性：贴壁
培养条件：高糖DMEM
细胞污染：HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌检测阴性。
细胞传代步骤：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。1.
细胞复苏步骤：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
细胞冻存步骤：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
培养步骤：
大鼠成骨细胞培养对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
 
操作流程：
1.1主要试剂与仪器：倒置相差显微镜（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293细胞的复苏培养传代及冻存：
1.2.1 细胞的复苏培养 从液氮罐中取出冻存管,立即投入37℃水浴,并不断的摇动,使之迅速融化。 将溶解的细胞冻存管取出,用酒精消毒后打开,吸出溶有细胞的冻存液,加入事先装好培养液（37℃预热，8～10倍体积）离心管内,稍微吹打混匀,然后1000rpm 5min,去除上清,加入适量培养液,吹打成细胞悬液, 以1×105/ml密度接种于25cm2培养瓶内，在37℃、5％co2及饱和湿度下培养。
1.2.2 细胞传代 原代培养的hek－293细胞48h换液1次，细胞长至60%～70%融合时，用0.25%胰酶消化1～2min，将培养瓶再用手掌轻轻敲打使细胞脱壁、悬浮、分散，为使细胞进一步分散可用吹打管轻轻吹打几次，获得细胞悬液，然后加入倍量的培养基，温和混匀，吸管分装混合液，传代扩增细胞。
1.3 细胞形态的观察 在倒置显微镜下观察并记录细胞的生长情况及形态特征。
1.4 细胞的计数 常规消化细胞，待细胞变圆、脱壁并浮起，加入少量培养基离心，再用pbs重悬并吹打制成细胞悬液。在细胞计数板盖玻片的一侧加微量细胞悬液，用10×物镜观察计数板四角大方格细胞数，按公式计算出细胞数。细胞数/ml原液＝(四方格细胞数之和/4) ×104。
1.5 细胞的贴壁率 指数生长期的细胞，以0.25％胰酶消化成单细胞悬液，计数后分别接种于12个25cm2培养瓶中，每两小时随机取出3瓶细胞，吸除培养基及未贴壁细胞，加入胰消化酶消化、计数已贴壁细胞，取其平均值，按照公式：贴壁率(%)=(已贴壁细胞数/接种细胞数) ×100％，计算贴壁率。 
1.6 生长曲线 取指数生长期的细胞用胰酶消化制成单细胞悬液，以1×104/孔接种于24孔板，每孔加入1ml培养基。每天随机取3孔，计数每孔细胞的数目并计算平均值。连续计数10d，绘制细胞生长曲线。
干酪素，100g　Salcitonin Acetate(Salmon Calcitonin)　规格：>95%,BR
干酪素，500g　 Salbutamol　规格：含量测定
干酪素，100g　 SaikosaponinB1　规格：HPLC≥98%，标准品
干酪素，500g　 Saikosaponin C　规格：HPLC≥98%，标准品
干酪素钠，100g　 Saikosaponin B2　规格：HPLC≥98%，标准品
干酪素钠，25g　 Saikosaponin A　规格：HPLC≥98%，标准品
干酪素钠，500g　 Saikosaponian D　规格：HPLC≥98%，标准品
肝素钠，100g　 S-adenosyl-L-methionine (SAM)　规格：BR,纯度>96%,干品腺苷蛋氨酸>49%
肝素钠，1g　 S-Acetylthioglycolic acid N-hydroxysuccinimide ester　规格：>98%,BR
L-谷氨酸二甲酯盐酸盐，10g　 Ibuprofen　规格：含量测定
L-谷氨酸二甲酯盐酸盐，25g　 iBu-DMT-dG　规格：>98%,BR
L-谷氨酸二乙酯盐酸盐，100g　 Ibudilast　规格：>98%
L-谷氨酸二乙酯盐酸盐，25g　 Ibudilast　规格：HPLC>99%,标准品"
L-谷氨酸二乙酯盐酸盐，5g　ibu-dG　规格：>98%,BR
L-异亮氨酸甲酯盐酸盐，100g　 Ibrutinib,PCI-32765　规格：>98%,BTK抑制剂
L-异亮氨酸甲酯盐酸盐，25g　 Hypoxanthine　规格：>98%,BR
L-异亮氨酸甲酯盐酸盐，5g　 Hypocrellin　规格：HPLC≥98%,标准品
L-亮氨酸甲酯盐酸盐，100g　 Hyperoside　规格：HPLC≥98%，标准品
大鼠成骨细胞培养Junctophilin 3  连接蛋白JPH3抗体规格 0.2ml
Jun D  活化蛋白激酶D抗体规格 0.1ml
Jun B  活化蛋白激酶B抗体规格 0.1ml
JNK3/MAPK10  氨基末端激酶3抗体规格 0.1ml
JNK2  氨基末端激酶2抗体规格 0.2ml
JNK1/3  氨基末端激酶1/3抗体规格 0.1ml
JNK1/2/3  氨基末端激酶1/2/3抗体规格 0.1ml