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- 文献和实验
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- 库存:
23
- 保质期:
详见说明书
- 供应商:
上海抚生
- 保存条件:
低温冷藏
- 规格:
200ml/KIT
产品名称 鸡肿瘤浸润组织白细胞分离液试剂盒哪里有买
规格: 200ml/KIT
储存条件 2-8℃
单位 盒
1. 样品染色
1) 将Binding Buffer(10×)稀释成1×Binding buffer工作液备用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml无菌去离子水)。
2) 对于悬浮细胞,500-1000g离心5min收集细胞。
对于贴壁细胞,要用不含EDTA的胰酶消化细胞,胰酶消化时间不宜过长或过短,最好是在轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时,加入细胞培养液,将细胞轻轻吹打下来,转移到离心管内,500-1000g离心5min收集细胞。
3) 收集细胞后,加入预冷PBS溶液轻摇或用移液器轻柔吹打洗涤,离心收集细胞,共洗涤两次。
4) 在细胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重悬细胞,使细胞浓度达到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl细胞悬液(细胞总数为1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,轻轻混匀,室温避光孵育15min。
2. 样品检测
1) 流式细胞仪检测:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混匀后使用流式细胞仪检测(1小时内检测)。
建议设置经凋亡诱导的正常细胞、PI单染和Annexin V-FITC单染3个对照组,正常细胞组可作为荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的位置。结果可用CellQuest等软件进行分析,绘制双色散点图(two-color dot plot),FITC为横坐标,PI为纵坐标。Annexin V-FITC和PI联合使用时,活细胞仅有很低强度的背景荧光,早期凋亡细胞仅有较强的绿色荧光,晚期凋亡细胞有绿色和红色双重荧光。
2) 荧光显微镜检测:
染色孵育后涂片,显微镜下观察。使用荧光显微镜上的蓝光和绿光通道分别观察FITC和PI。被Annexin V-FITC结合的细胞显示浆膜上有绿色光环。丧失细胞膜完整性的细胞,细胞核显示红色,膜上有绿色光环。
1. 整个操作过程动作要尽量轻柔,勿用力吹打细胞,尽量在4℃下操作。
2. 反应完毕后请尽快检测,反应1 小时后荧光强度就开始衰变。
3. Annexin V-FITC 和 Propidium iodide 是光敏物质,在操作时请注意避光。
4. 试验操作过程中佩戴手套等防护用品。
5. 试验开始前将一定量的 10×Annexin V Binding Buffer 用超纯水(1:9)稀释至 1×备用。
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1瓶 5637细胞株 5637 低温运输和保存
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1 mg MM4-64(FM®4-64) Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存
1瓶 HP615细胞株 HP615 低温运输和保存
克氏琼脂 Kligler's Agar 250g
化十六基三甲琼脂培养基 用于绿脓杆菌及其它革兰氏阴性非发酵菌的选择性分离培养。(《中华人民共和国药典》2010年版) 250g
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2 ug pHY43 pHY43 低温运输,-20℃保存
250mL Sodium Phosphate Buffer(磷酸钠缓冲液),0.5M,pH7.5 Sodium Phosphate Buffer,0.5M,pH7.5 常温保存
1套 可逆性铜染试剂盒
1瓶 A549/DDP细胞株 A549/DDP 低温运输和保存
2 ug pMET C pMET C 低温运输,-20℃保存
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乙酸纤维素 Cellulose acetate 94-35-7 质量规格:BR
EDAC 1-乙基-(3-二氨基丙基)碳二亚盐 25g 瓶
Inositol 肌醇 87-89-8 20mg
克林沙星 Clinafloxacin 105956-97-6 质量规格:>98.5%
聚酰60-1目 5g 瓶
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避蚊(99%) DEET 134-62-3 质量规格:0.99
20×SSPE PH7.4 5ml 瓶
DiI高酸盐 1 mg 支
2×Pfu PCR MasterMix (含染料) 5×1ml 瓶
Cholesterol 胆固醇 1kg 瓶
N-乙酰甘氨酸 N-Acetylglycine 543-24-8 质量规格:>98%
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