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- HE32144-R
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- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
29
- 英文名：
详见说明书
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
48T
是从土壤农杆菌 CP4 菌株中分离得到的抗除草剂草甘膦基因，是转基因植物研究中最为常用的一种筛选标记基因，因此本公司根据探针法 qPCR 原理开发了专门用于检测 的试剂盒，它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供样品 DNA 模板。
2. 根据保守区域设计引物和探针，能专一性地检测出样品中的
成分，但不能检测其他非成分。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. 一管式闭管操作，降低了交叉污染。
5. 快速，整个检测过程（按一个样品计）所需时间仅为 2.0 小时。
6. 本只能用于科研，足够 50 次 20uL 体系的探针法荧光定量 PCR。
| 产品名称 | 单核细胞增生李斯特氏菌核酸检测试剂盒（恒温荧光法） |
| 规格 | 48T |
| 编号 | HE32144-R |
荧光化学物质：
实时荧光定量PCR所使用的荧光物质可分为两种：荧光探针和荧光染料。现将其原理简述如下：
1. TaqMan荧光探针：PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5'－3'外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。而新型TaqMan-MGB探针使该技术既可进行基因定量分析，又可分析基因突变（SNP），有望成为基因诊断和个体化用药分析的技术平台。
2. SYBR荧光染料：在PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBR荧光染料非特异性地掺入DNA双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。SYBR仅与双链DNA进行结合，因此可以通过溶解曲线，确定PCR反应是否特异。
3. 分子信标：是一种在5和3末端自身形成一个8个碱基左右的发夹结构的茎环双标记寡核苷酸探针，两端的核酸序列互补配对，导致荧光基团与淬灭基团紧紧靠近，不会产生荧光。PCR产物生成后，退火过程中，分子信标中间部分与特定DNA序列配对，荧光基因与淬灭基因分离产生荧光 。
荧光定量PCR服务：
简介：实时荧光定量PCR技术于1996年由美国Applied Biosystems公司推出，该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点，目前该技术已被广泛用于检测细胞mRNA表达量的变化；比较不同组织的mRNA表达差异；验证基因芯片，siRNA干扰的实验结果等。我公司为您提供全套实时荧光定量PCR技术服务，全部实验皆使用进口试剂完成，主要定量PCR仪器。
1、荧光定量PCR服务要求：
（01）请您提供新鲜的且尽量多的材料；或直接提供纯化好的总RNA（大于 5 ug/样品）；或直接提供纯化好的DNA（大于 5 ug/样品）。
（02）请提供已知的全长基因序列。
（03）请提供尽可能详细的背景资料：DNA/RNA 来源等
2、荧光定量PCR操作程序
（01）引物（探针）设计与合成。
（02）提取DNA/RNA，样本逆转录成cDNA。
（03）进行Real Time PCR实验，进行实验结果分析。
（04）实验完成后，提供完整的实验报告（含软件分析结果）及引物等实验材料。
3、荧光定量PCR的收费标准：
我公司根据客户的样品数量进行不同的收费标准。
98%500g25gTris-HCl缓冲液(1mol/L,pH9.0)NMDALR，95%98%500gMTL
98%500g5gTris-HCl缓冲液(1mol/L,pH9.0)N-methyl-D-asparate receptorAR，98%98%500gGhrelin
98%100g5gTris-HCl缓冲液(1mol/L,pH7.0-9.0,无菌)Vacuolating cytotoxin A IgGFGC，40-60目98%100gGas
99%250g1gTris-HCl缓冲液(0.05mo
单核细胞增生李斯特氏菌核酸检测试剂盒（恒温荧光法）新橙皮苷Staphylococcal Enterotoxin B
新橙皮苷dihydrofolate reductase
新橙皮苷Early secretory antigenic target-6
S-8大孔吸附树脂 dihydrofolate reductase
头孢哌酮 Super Oxidase Dimutase
头孢哌酮 Peroxidase
3,4-二羟酸carboxyhemoglobin
3,4-二羟酸Prothrombin
3,4-二羟酸B-Lymphocyte Chemoattractant 1
塞来西布Leukotriene C4
原理:
单核细胞增生李斯特氏菌核酸检测试剂盒（恒温荧光法）所谓实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
检测方法
1.SYBRGreenⅠ法：
在PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。
SYBR定量PCR扩增荧光曲线图
PCR产物熔解曲线图
2.TaqMan探针法：
探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5’-3’外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物的形成完全同步。
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文献和实验增菌，费时费力。FDA于1987年最新研制出针对李斯特菌致病基因β 溶血素的探针，随后GENE-TARK研制出商品化检测李斯特菌的DNA探针，它能特异性识别细菌的16SrRNA.该探针是由人工合成的寡核苷酸，用比色法检测样品需先在LEB中培养16 22h,然后侵染比色检测，假阴性率为0.8 4.7%（常规法为1.4 2.9%.）1989年Bessesea等运用扩增李斯特菌溶血素基因中386bp的PCR方法检测单核细胞增生型李斯特菌，DNA检测量低于25ng,即少于1000个菌体，特异性强，能检测
法是一项新型的核酸扩增技术，一小时内可以检测出IHHNV结果。广州双螺旋基因技术有限公司根据恒温PCR原理，研发出Dhelix-C水产病害检测仪，配合使用恒温荧光法IHHNV核酸检测试剂盒，在65°C的恒温条件下反应，利用Bst DNA聚合酶完成置换扩增。反应体系中含有荧光染料，Dhelix-C水产病害检测仪能通过光学软件检测扩增后荧光信号的变化，将荧光信号表达为扩增曲线，同时仪器自动判读检测结果，从取样到结果显示仅需1~2个小时，仪器操作简单，非专业背景人员也可以轻松掌握，更适用于对虾IHHNV现场
属、枸橼酸杆菌属、克雷伯菌属和沙雷氏菌属等。而不发酵乳糖的细菌如沙门菌、变形杆菌和肠杆菌科中其他不发酵乳糖的细菌ONPG试验均为阴性。④其他生化试验：如淀粉水解试验、七叶苷水解试验、甲基红试验及VP试验等。（3）革兰氏染色法：染色除能观察细菌形态外，还可根据其染色反应，将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性菌两大类。如沙门菌属、志贺菌属、巴斯德杆菌及耶尔森菌等均为革兰氏阴性菌，革兰氏阳性菌有肺炎链球菌、单核细胞增生性李斯特杆菌、金黄色葡萄球菌、鼠棒状杆菌等。（4）血清学鉴定：除生化鉴定外，必要时可进
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