huPBMC-NCG
业务简介
huPBMC-NCG小鼠是将人外周血单个核细胞(Peripheral Blood Mononuclear Cell, PBMC)移植到重度免疫缺陷小鼠NCG体内,从而获得的重建人免疫系统的NCG小鼠模型。
huPBMC-NCG小鼠人源化模型实验设计流程图
药康优势
集萃药康自主研发的NCG小鼠是使用基因编辑技术敲除了NOD/ShiltJNju小鼠的Prkdc及Il2rg基因而获得的重度免疫缺陷品系。NCG小鼠具有T细胞、B细胞、NK细胞缺失的特征,是迄今为止免疫系统缺陷最为彻底的小鼠模型,非常适合人外周血单个核细胞(PBMC)及人源造血干细胞(CD34+HSC)移植进行免疫重建。
在NCG小鼠上进行的huPBMC免疫重建效率高,主要以T细胞为主。huPBMC-NCG小鼠免疫重建后可存活1个月左右,可用于进行多种肿瘤免疫药物的评价,同时也是理想的GVHD评价模型。
由于PBMC供体来源影响免疫重建的进程,集萃药康建立了多个PBMC 供体库,用于保证PBMC数据的稳定性。
业务详情
1.huPBMC-NCG小鼠的生存曲线
分别将来源于供体F和供体G的huPBMC注射到NCG小鼠中,分析huPBMC-NCG免疫重建小鼠的存活时间。由于植入的PBMC为异源免疫细胞,huPBMC-NCG小鼠会随着时间推移产生移植物抗宿主疾病(GvHD),即人源免疫系统攻击小鼠组织器官,最终导致小鼠死亡,缩短了huPBMC-NCG小鼠的使用窗口期。本研究发现NCG小鼠移植huPBMC一个月左右陆续出现死亡。
2.huPBMC-NCG免疫重建速度快,重建细胞以CD3+T细胞为主
利用流式细胞技术检测huPBMC-NCG小鼠人源化进程中外周血中人白细胞比例。结果表明,随着时间推移,huPBMC-NCG小鼠外周血中人白细胞的比例逐渐增加,第三周时平均人白细胞比例超过50%。因为该模型会发生GvHD,推荐使用huPBMC-NCG小鼠时,根据实验需求在人源化程度和使用窗口期之间进行优化。数据以Mean ±SEM形式呈现。
利用流式细胞技术检测在huPBMC-NCG小鼠脾脏、外周血及骨髓中人白细胞的相对含量,结果表明huPBMC-NCG小鼠体内人白细胞分布具有明显的组织差异性,人白细胞水平从高到低为脾脏>外周血>骨髓。数据以Mean±SEM形式呈现。*P<0.05;**P<0.01;***P<0.001。
3.基于huPBMC-NCG小鼠体内药效试验
分别使用两种不同Donor来源的huPBMC细胞构建huPBMC-NCG,并接种PDL1高表达细胞系MDA-MB-231构建皮下荷瘤模型。PBMC接种后会影响MDA-MB-231在NCG体内的成瘤速度。待肿瘤生长至平均体积约100 mm3时随机分为Vehicle(对照)组及Tecentriq给药组(n=5-6),使用相应药物进行治疗。每周给药2次,连续给药三周,可用于评估Tecentriq等靶向PD-1/PDL1通路药物的抗肿瘤效果。结果显示Tecentriq对肿瘤生长有明显抑制作用(PBMC-01 TGI=45.41%, PBMC-02 TGI= 56.96%)。数据以Mean ± SEM 形式呈现。
4.辐照可加速huPBMC-NCG小鼠GvHD反应的发生
在huPBMC尾静脉移植NCG小鼠之前辐照处理NCG小鼠。由于植入的PBMC为异源免疫细胞,huPBMC-NCG小鼠会随着时间推移产生移植物抗宿主疾病(GvHD),即人源免疫系统攻击小鼠组织器官,最终导致小鼠死亡,缩短了huPBMC-NCG小鼠的使用窗口期。本研究发现辐照能够加速huPBMC-NCG免疫重建小鼠的GvHD的发生,缩短生存时间,非常适用于GvHD相关研究和药物开发及UCAR-T GvHD评价的动物模型。