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Cytiva
概述
HisPrep FF 16/10 是一种预装式即用型层析柱,预装有 Ni Sepharose 6 Fast Flow 层析填料。该层析柱是对带组氨酸标签的重组蛋白质进行制备、放大纯化的选择。
- 为方便进行组氨酸标签蛋白的纯化工艺放大而优化。
- 耐受各种还原剂、去污剂、变性剂和其他添加剂。
- Ni2+ 的脱落可忽略不计。
- 高结合载量,约 40 mg/mL 层析填料。
- 20 mL 的 HiPrep 预装规格方便且省时。
HisPrep FF 16/10 层析柱预装有 Ni Sepharose 6 Fast Flow,用于实现带组氨酸标签的蛋白质的纯化工艺放大。Ni Sepharose 6 Fast Flow 由其上固定有螯合配基的 90 μm 高度交联琼脂糖基架组成。该螯合配基上带有 Ni2+ 离子,是纯化大多数带组氨酸标签的蛋白质的金属离子。Ni2+ 离子脱落可忽略不计,因此可确保在重复 IMAC 纯化中可靠地捕获带组氨酸标签的蛋白质。
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文献和实验Allison C. Mallory, Bartel Lab Whitehead InstituteFor 1% Agarose Gel:StockAgarose1g10 X FF buffer10mlwater 88ml1. Boil to dissolve agarose2. Cool it to about 60℃3. Add formaldehyde to a final concentration of 7% (18ml of lab 40% stock) and mix
电泳缓冲液4μl,甲醛 3.5μl,甲酰胺10μl,加入无菌离心管中混合,95℃水浴变性2min(或55℃,15min),取出后放入冰中冷却。2) 加入2μl无菌的DEPC处理的加样运载液。(使用加样运载液的目的有三: 增大样品密度, 以确保DNA均匀进入样品孔内; 使样品呈现颜色, 便于加样操作; 能明确显现样品在电泳胶上的泳动位置. 以 0.5 X TBE作电泳液时, 溴苯酚在琼脂糖中的泳动速率与长 300 bp 的双链线状DNA相同 , 而二甲苯氰FF 的泳动速率与长 4kb 的双链线状DNA相同
buffer)。 随后以 5-7 ml/min 将酶稀释液注入预装柱中,4℃ 下孵育 12-16h。先洗脱的是酶切后的无标签目标蛋白。 再用含 10mM 还原型谷胱甘肽的 buffer 可以将含 GST 标签的所有组分洗脱。 结语 柱上酶切以其灵活快速的特点简化了我们的实验过程。选择合适的内切酶及构建相应的氨基酸识别序列是成功酶切的关键。 Cytiva 提供一个全流程 GST 标签融合蛋白解决方案,包含 pGEX 系列
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