Rat ICAM-1 ELISA Kit

碧云天的Rat ICAM-1/CD54 ELISA Kit (Rat Intercellular Adhesion Molecule 1 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即大鼠细胞间粘附分子1酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测大鼠血清、血浆或细胞培养上清液中的ICAM-1/CD54的ELISA试剂盒。
本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为53.2pg/ml，与GDNF、GM-CSF、TNF-α、IL-1α、IL-1β、IL-2 、IL-4 、PDGF-BB、IL-10，人 ICAM，小鼠ICAM等均没有交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%。
大鼠细胞间粘附分子(Intercellular Adhesion Molecule 1, ICAM-1)，又称CD54，是一种分子量在80-110kDa之间的I型跨膜糖蛋白，在多种细胞上都有表达。ICAM-1分子共有545个氨基酸，其中包括27个氨基酸信号肽，466个氨基酸的胞外域、25个氨基酸的跨膜域和27个氨基酸的胞质域。在胞外域具有5个免疫球蛋白样区域和11个潜在的N连接糖基化位点。N端的第一个免疫球蛋白区域(D1)能够与淋巴细胞功能相关抗原1 (Lymphocyte Function Associated Antigen 1, LFA-1)结合，而第三个免疫球蛋白区域则能与Mac-1结合。膜结合的ICAM-1通常以二聚体形式存在，但单体的ICAM-1同样也能够与IFA-1结合。通过MMP-9及弹性蛋白酶介导的蛋白水解作用能够得到游离的ICAM-1。游离的ICAM-1二聚体与LFA-1具有更高的亲和力。成熟的大鼠ICAM-1与小鼠ICAM-1、人ICAM-1、犬ICAM-1和猪ICAM-1分别具有77%、52%、53%和49%的氨基酸同源性。
表达ICAM-1的细胞主要有平滑肌细胞、角质细胞、内皮细胞、成纤维细胞、气道上皮细胞、记忆T细胞、B细胞、浆细胞、单核细胞、红系祖细胞、活化的嗜酸性粒细胞及中性粒细胞、施万细胞、黑色素细胞和树突状细胞等。目前ICAM-1已知存在4种配体(或辅助受体)，其中两种分别是整合素LFA-1/αLβ2 (CD11a/CD18)和Mac-1/αMβ2 (CD11b/CD18)。整合素β2主要表达在白细胞上，淋巴细胞主要表达LFA-1，而在自然杀伤细胞、中性粒细胞和单核细胞二者都有所表达。剩余两种配体则分别为载唾液酸蛋白和纤维蛋白原。
ICAM-1作为一种跨膜分子主要参与细胞迁移、抗原呈递和白细胞激活。当与LFA-1结合后，ICAM-1能够产生三种效应：炎症发生时，表达ICAM-1的内皮细胞能够调节IFA-1+的白细胞迁移并粘附在相应内皮细胞上，另外，表达ICAM-1的抗原提呈细胞和T细胞还能创造一个粘附界面，从而延长抗原呈现时间；ICAM-1配体能够对表达ICAM-1的细胞产生单一的诱导效应，例如表达ICAM-1的内皮细胞会将信号传递至细胞内，从而导致细胞骨架重构和内皮细胞收缩。当作用于T细胞时，ICAM-1激活会诱导幼稚T细胞增殖以及Th1细胞因子分泌；ICAM-1还能作为一个“被动配体”，促进LFA-1的调节活性。
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中大鼠ICAM-1/CD54的浓度，其原理见图1。大鼠ICAM-1/CD54特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的大鼠ICAM-1/CD54会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗大鼠ICAM-1/CD54抗体后，生物素化抗大鼠ICAM-1/CD54抗体与大鼠ICAM-1/CD54结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。大鼠ICAM-1/CD54浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中大鼠ICAM-1/CD54浓度。

图1. 双抗体夹心ELISA原理图。

一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。
包装清单：

产品编号	产品名称	包装
PI495-1	大鼠ICAM-1/CD54抗体预包被板	8孔×12条
PI495-2	样品分析缓冲液	5ml
PI495-3	标准品稀释液（5X）	20ml
PI495-4	大鼠ICAM-1/CD54标准品	2-4瓶
PI495-5	大鼠ICAM-1/CD54生物素化抗体	10ml
PI495-6	辣根过氧化物酶标记Streptavidin	10ml
PI495-7	洗涤液(20X)	30ml
PI495-8	TMB溶液	10ml
PI495-9	终止液	5ml
PI495-10	封板膜(透明)	2张
PI495-11	封板膜(白色)	2张
-	说明书	1份

保存条件：
标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效；试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。
注意事项：
由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。
洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。
TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。
加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。
由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。
充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。
本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。
洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。
检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。
加样过程中须避免气泡的产生。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。