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Human G-CSF ELI
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碧云天的Human G-CSF ELISA Kit (Human Granulocyte Colony-Stimulating Factor Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit),即人粒细胞集落刺激因子酶联免疫吸附检测试剂盒,是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中的G-CSF的ELISA试剂盒。本产品检测灵敏度高,特异性强,重复性好。多次重复检测结果表明,最小检出量为28.5pg/ml,与人EGF、Epo、FGF acidic、FGF basic、GM-CSF、HGF、IFN-γ、IGF-I、IGF-II、IL-1、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12、IL-13、KGF、LIF、M-CSF、MCP-1、SCF、TGF-α、TGF-β1、VEGF等均没有交叉反应,板内、板间变异系数均小于10%。粒细胞集落刺激因子(Granulocyte Colony-Stimulating Factor, G-CSF)是一种分子量为24-25kDa的单体糖蛋白,主要参与调控造血细胞的增殖、分化和激活过程。成熟的人G-CSF具有178个氨基酸长度,包含两个链内二硫键。人和小鼠的G-CSF具有76%的氨基酸同源性,并且具有一定的交叉反应性。G-CSF主要由活化的单核细胞、巨噬细胞、成纤维细胞、内皮细胞、星形胶质细胞、神经元细胞和骨髓基质细胞产生,此外,许多肿瘤细胞也能表达G-CSF。人G-CSF受体(G-CSF R)分子量120kDa,是一种I型跨膜糖蛋白,属于血细胞生成素受体家族。成熟受体蛋白具有603个氨基酸的胞外域、23个氨基酸的跨膜片段以及186个氨基酸的胞内域。受体胞外域包含有N端的免疫球蛋白样区域、细胞因子受体同源区和三个III型纤连蛋白区。人和小鼠G-CSF受体的胞外域具有63%的氨基酸同源性。G-CSF R与配体按2:2比例形成受体-配体复合物。G-CSF R主要在单核细胞、中性粒细胞、巨核细胞、血小板、髓系祖细胞、胚胎滋养层细胞、内皮细胞和多种肿瘤细胞中有所表达。G-CSF和受体结合后主要影响JAK/STAT、SRC家族激酶、PI3K/AKT和Ras/ERK1/2通路。在体内,G-CSF是粒细胞生成的重要调节因子,G-CSF R的突变会导致先天中性粒细胞减少症。G-CSF能帮助多种造血祖细胞生长,并促进其从骨髓进入血液。G-CSF能够增强成熟中性粒细胞的功能,减少其凋亡。同时G-CSF还能增强M-CSF诱导的单核细胞生成,刺激树突细胞增殖。G-CSF还可以增强T细胞的免疫耐受性,在发生心梗和大脑缺血后,帮助组织尽快恢复。本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中人G-CSF的浓度,其原理见图1。人G-CSF特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上,当加入标准品或样品时,其中的人G-CSF会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗人G-CSF抗体后,生物素化抗人G-CSF抗体与人G-CSF结合,形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin (HRP-Streptavidin),由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合,因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液,固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质,在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。人G-CSF浓度与A450值呈正比,通过绘制标准曲线,对照样品吸光度值,即可计算出样品中人G-CSF浓度。
图1. 双抗体夹心ELISA原理图。
一个包装的本试剂盒,包括标准品检测,可以进行96次检测。包装清单:
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