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鬼笔环肽Biolite 64
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西安百萤生物科技有限公司
鬼笔环肽是从一种菌类Amanita Dhalloides所提取出来的环肽。它与F-actin竞争性的结合。荧光标记的鬼笔环肽在纳克水平就可与F-actin选择性的结合并且易溶于水,为检测组织切片,培养细胞和无细胞体系中的actin的定位和定量提供了非常方便的标记方法。
Biolite 647标记的鬼笔环肽,可发出高亮度、稳定的远红外荧光,染色反应特异性强,对比性高,适合用作F-actin的定性和定量检测。与Actin抗体比较,Biolite 647标记鬼笔环肽具有以下特点:1 与actin亚单位一比一结合,且不与G-actin结合,比Actin抗体的染色效果更好;2本品的结合没有物种差异性,适用性广泛;3鬼笔环肽标记的非特异性信号可忽略,因而图像的反差较好;4染色与用于细胞分析的其他荧光染色完全兼容,包括荧光蛋白和其他Alexa Fluor偶联物(包含Alexa Fluor偶联二抗);5与其结合后的F-actin仍能维持actin自身的许多生物学特性。产品光谱图:
样品分析方案
概述
在微孔板孔中制备样品
从样品中取出液体
添加鬼笔环肽-iFluor 647标记溶液(100μL/孔)
在室温下染色细胞20至90分钟
清洗细胞在显微镜下观察样品
注意:将小瓶加热至室温并在打开前短暂离心。
操作步骤
1.制备1000 X鬼笔环肽DMSO储备液:将30μLDMSO加入小瓶中。
2.制备1X鬼笔环肽结合物工作溶液:加入1μL1000X鬼笔环肽结合物DMSO溶液至1mL含1%BSA的PBS中。
注意1:鬼笔环肽结合物未使用的1000X DMSO储备溶液应等分并储存在-20℃,避光。
注意2:不同的细胞类型可能染色不同。鬼笔环肽结合物工作溶液的浓度的制备需要根据实际而定。
3.染色细胞:
3.1执行甲醛固定,在室温下将含3.0-4.0%甲醛的细胞在PBS中孵育10-30分钟。
注意:避免使用任何含甲醇的固定剂,因为甲醇会在固定过程中破坏肌动蛋白。 优选的固定剂是不含甲醇的甲醛。
3.2用PBS冲洗固定细胞2-3次。
3.3可选:在PBS中加入0.1%Triton X-100固定细胞(步骤2.2)3至5分钟,以增加渗透性。 用PBS冲洗细胞2-3次。
3.4将100μL/孔(96孔板)鬼笔环肽缀合物工作溶液(来自步骤1)加入固定的细胞(来自步骤2.2或2.3)中,并在室温下染色细胞20至90分钟。
3.5在加上盖玻片之前,用PBS轻轻冲洗细胞2至3次以除去过量的鬼笔环肽结合物,然后在显微镜下进行,密封和成像。
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