隐孢子虫通用染料法荧光定量PCR试剂盒

隐孢子虫通用染料法荧光定量PCR试剂盒克隆技术是分子生物学实验的核心技术之一。通过PCR扩增获得的DNA片段通常需要克隆到质粒载体中，用于测序、亚克隆、表达等后续实验。利用Taq DNA聚合酶在产物的3’-端添加一个突出A碱基的特点而设计的TA克隆技术，使得PCR产物克隆变得更加方便、高效：

PCR引物不需要设计限制性内切酶识别序列
PCR产物不必进行酶切、末端补平或添加接头等处理
高拷贝的载体和通用的引物序列，便于测序、扩增、酶切

隐孢子虫通用染料法荧光定量PCR试剂盒产品及特点 本试剂盒是整合 cDNA 第一链合成试剂（RT 试剂盒）和即用型 qPCR 试剂而得的qRT-PCR 试剂盒。cDNA 第一链合成反应和 qPCR 反应分别在两个离心管中进行。本试剂盒具有下列特点：
1. 即开即用，足够 50 次 RT 反应（10uL 体系）和 50 次 qPCR 反应（20 uL 体系）。
2. RT 和 PCR 分开进行，方便优化 RT 和 qPCR 条件，也方便一个 RT 反应用于多个不同引物的 qPCR 扩增。
3. RT mix 中含除酶、模板和引物以外的 RT 成分，简化了反应设置步骤。
4. qPCR mix 是 2×预配液，也简化了反应设置步骤。
5. qPCR mix 含 qPCR 染料，无需另外加入相关荧光 PCR 染料。
6. 扩增效率高, 最长可扩增 5 Kbp 以上的 RNA。
7. 提供定量 PCR 专用模板稀释液，保证在制作标准曲线时低浓度样品的准确性。
qPCR（20 uL 体系）
8、在每个 PCR 管中加入下列成分：
成分 加入量
qPCR MagicMix 10 uL
cDNA 样品（来于上步的 RT 反应） 2 uL
PCR 正向引物(10 pmol/uL) 1 uL
PCR 反向引物(10 pmol/uL) 1 uL
自备 ROX 染料 I 或 II（见注） 2 uL
RNase-free 水 4 uL
注意：如果使用 ABI 公司的 7500，7700 和 7900 三种型号的荧光 PCR 仪器，则需用自备的 ROX 进行 Ct 值校正。对 ABI 7700 和 7900，ROX 的最佳浓度为 1×（即
在每 20 uL 反应体系中加 2 uL 10×ROX）。对 ABI 7500， ROX 的最佳浓度为0.05-0.1×（每 20 uL 反应体系加 0.1-0.2 uL 10×ROX；也可将 10×ROX 稀释到
1×，然后每个反应体系加入 1-2 uL 1×ROX）。ROX 会在溶解曲线中产生噪音，因此，如果出现了杂峰，将软件中“Passive Reference Dye”中的“ROX”选项取消打
勾，然后重新分析数据。
对于iCycler IQ，MJ Opticon，MJ Chromo4，MX3000，MX4000, RotorGene3000，RotorGene 6000 和 LightCycler 480 等型号的荧光 PCR 仪器，ROX 不是必须的，
但加入的话也不会影响整个 PCR 分析。