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43
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Rosetta-gami(DE3)pLysS, Rosetta gami DE3 pLysS
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上海谷研
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| 产品名称 | Rosetta-gami(DE3)pLysS, Rosetta gami DE3 pLysS |
| 生长条件 | 37 ℃, 有氧 |
| 编号 | GOY-3265 |
感受态细胞名称: Rosetta-gami(DE3)pLysS, Rosetta gami DE3 pLysS
菌株类型:E.coli
培养基:LB培养基
生长条件:37 ℃, 有氧
基因型:Rosetta-gami(DE3)pLysS感受态细胞菌株基因型
抗性:氯霉素,卡那,链霉素,四环素
质粒转化条件:42 ℃热激
应用:蛋白表达
诱导方法:IPTG
菌株特点:
Rosetta-gami系列菌株来源于Origami系列宿主菌,该系列菌株的有点除了含有Origami菌株原有的TrxB和Gor基因突变提高含二硫键正确折叠 蛋白的高效表达,同时含有Rosetta系列菌株中含有的真核细胞稀有密码子。该菌株同时集合了Origami(DE3)和Rosetta(DE3)的优点。
Rosetta-gami(DE3)pLysS系列菌株含有pRARE质粒,能够提供AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, 和GGA六个真核细胞中的稀有密码子tRNA,能够有效提升真核细胞蛋白的表达水平。pRARE质粒具有氯霉素抗性。
Rosetta-gami(DE3)pLysS感受态细胞同时具有氯霉素,卡那,链霉素和四环素四种抗生素抗性。
Rosetta-gami(DE3)pLysS被建议使用于含有Bla标记的氨苄抗性表达质粒。当使用pCDF系列载体时,还需要使用壮观霉素(Spectinomycin)进行筛选。菌株中 的rpsL突变使得该菌株具有链霉素抗性
DE3是溶源性的 λDE3, 所以带有T7 RNA聚合酶的染色体拷贝。该菌株适用于pET系列载体,及其他T7启动子系列载体。
含有pLSs质粒,pLySs质粒能够产生T7溶菌酶,可以有效降低目的基因的基础表达水平。pLySs质粒使得该菌株具有氯霉素抗性。pLySs质粒的起始复制位点是p15 Origin, 这使得该质粒能够和pUC-及pBR322-衍生的质粒互相共存。
亮氨酸生长缺陷型菌株。
河蟹颤抖病病毒PCR检测试剂盒 Chinese Mitten Crabs Trembling Disease VirusRTPCR规格:0.5ml*10用途:用于金黄色葡萄球菌的血浆凝固酶试验(GB、SN标准)。
肺炎衣原体PCR检测试剂盒 Chlamydia pneumoniaePCR规格:5ml/支*8用途:用于细菌瑞氏染色
鹦鹉热衣原体PCR检测试剂盒 Chlamydia psittaciPCR规格:250g用途:用于样品制备水稀释
衣原体通用PCR检测试剂盒 Chlamydia spp.PCR规格:250g用途:用于李氏菌的增菌培养
沙眼衣原体PCR检测试剂盒 Chlamydia trachomatisPCR规格:250g用途:用于植物组织培养(不含琼脂和蔗糖)
叶酸
中文别名: 蝶酰谷氨酸;N-(4-((2-氨基-4-氧代-1,4-二氢-6-蝶啶)甲氨基)苯甲酰基)-L-谷氨酸
英文名: Folic acid
英文别名: Kosher certificate;2-amino-6-((p-((1,3-dicarboxypropyl)carbamoyl)anilino)methyl)-4-pteridino(l)
CAS登录号: 59-30-3
分子式: C19H19N7O6
分子量: 441.40
分子结构:
外观: 淡橙黄色结晶
规格: 20 mg/支
纯度: ≥ 98%
用途: 用于含量测定/鉴定/药理实验等。
提取来源: 藜科植物菠菜Spinacia oleracea
溶解性: 溶于热的稀盐酸和,略溶于乙酸,酚吡啶,氢氧化碱和碳酸碱溶液,微溶于甲醇,不溶于乙醇和丁醇,不溶于醚、、氯仿和苯。
熔点: 250℃
药理药效: 对婴幼儿的神经细胞与脑细胞发育有促进作用,抗肿瘤作用,叶酸可作为精神分裂症病人的辅助治疗剂,它对此病有显著的缓解作用。
贮存条件: 4℃冷藏、密封、避光
有效期: 2年
天平、烘箱、玻璃管、离心机、水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、6mol/L盐酸和蒸馏水。
Glu广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,不仅是组成蛋白质的20种氨基酸之一,而且通过转氨基作用参与多种氨基酸合成,是生物体内主要氨基来源之一。此外,Glu还是味精的主要有效成分,常用做食品添加剂以及香料生产。
利用专用提取液提取,然后用显色剂进行显色,显色后在570nm下进行测定。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰、蒸馏水。
蛋白质含有三种含硫氨基酸:甲硫氨酸、胱氨酸和Cys。其中,Cys是唯一一种含有巯基的含硫氨基酸,从甲硫氨酸转化而来,并且可与胱氨酸互相转化。Cys参与蛋白质二硫键的形成,经常是蛋白质活性中心的组成部分,还可以为其它生理生化反应提供巯基。此外,Cys大量积聚在皮肤和粘膜表面,在角蛋白生成中维持重要的巯基酶的活性,并且补充巯基,以维持皮肤的正常代谢,调节表皮最下层的色素细胞生成的底层黑色素。具有美白、解毒、改善炎症和过敏性皮肤等作用。
Cys还原磷钨酸生成钨蓝,在600nm处有吸收峰;通过600nm吸光度,计算Cys含量。
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文献和实验2系列,thioredoxin reductase (trxB)和glutathione reductase (gor)两条主要还原途径双突变菌株,显著提高细胞质中二硫键形成几率,促进蛋白可溶性及活性表达。(卡那霉素敏感)Rosetta-gami™ 2 则是综合上述两类菌株的优点,既补充7种稀有密码子,又能够促进二硫键的形成,帮助表达需要借助二硫键形成正确折叠构象的真核蛋白。(卡那霉素敏感)Origami B 是衍生自 lacZY突变的 BL21菌株,这个突变能根据IPTG的浓度精确调节表达
Rosetta-gami B 细胞死亡,生长极困难 毒性蛋白 更严格的本底表达控制 pLysS 菌株 无克隆生长 过高本底表达 更严格的本底表达控制 pLysS、pLysE 菌株 重组质粒和菌株的保存建议 在实验室里保存重组菌株的时候,为了挑菌和传代方便,我们常用LB平板保存在4℃冰箱中,需要提质粒和表达接种的时候,就直接从平板上挑菌,但是这种方法对于重组质粒的稳定性不利
21(DE3)融源菌则是添加T7聚合酶基因,为T7表达系统而设计. 真核细胞偏爱的密码子和原核系统有不同,因此,在用原核系统表达真核基因的时候,真核基因中的一些密码子对于原核细胞来说可能是稀有密码子,从而导致表达效率和表达水平很低.改造基因是比较麻烦的做法,Rosetta 2 系列就是更好的选择―― 这种携带pRARE2质粒的 BL21衍生菌,补充大肠杆菌 缺乏的七种(AUA,AGG,AGA,CUA,CCC,GGA 及CGG)稀有密码子对应的 tRNA,提高外源基因、尤其是真核基因在原核系统
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