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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
365
- 英文名:
Circulating DNA Kit
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
于2~8℃,或分装后保存于-20℃
- 规格:
20次/100次/10次(L)/50次(L)
特别提示:包括磁珠法游离DNA提取试剂盒在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:磁珠法游离DNA提取试剂盒
英文名称:Circulating DNA Kit
产品货号:CZ003
产品规格:20次/100次/10次(L)/50次(L)
产品简介:
本产品采用超顺磁性微球和预制缓冲液,以快速高效的方法从0.2~5 mL血清或血浆等无细胞体液中提取游离DNA。提取的产物质量稳定可靠,可用于PCR扩增、测序和检测等后续实验。
操作流程:
准备物品(以1 mL反应体系为例):
● 1.5 mL离心管、15 mL离心管:1个/样品
● 单通道移液器:200 μL、1000 μL
● 漩涡振荡器
● 恒温金属浴(或水浴锅):55℃
● 磁性分离器:可选用百奥莱博磁性分离器
● 异丙chún(AR):0.5 mL/样品
● 75%(v/v)乙醇:3.8 mL/样品
首次使用前:
● 在Proteinase K干粉中加入指定量(见管身标签)的Solution A,混匀后保存于2~8℃,或分装后保存于-20℃。
● 75%(v/v)乙醇:用户自备。
操作步骤:
以1 mL样本量为例(若样本量≤5 mL,其反应管规格、缓冲液加入量请参考表1;若样本量>5 mL,请咨询技术支持)
1.裂解:取一个新的15 mL离心管,加入100 μL Proteinase K,再依次加入1 mL血浆或血清样本和800 μL Lysis Buffer,最大转速漩涡振荡混合均匀后,将离心管置于55℃加热10 min(每隔5 min漩涡震荡10 s)。
2.结合:向上述离心管中加入0.5 mL异丙chún,漩涡震荡30 s后,再加入100 μL Magnetic beads,最大转速漩涡震荡混匀后静置10 min,然后将离心管置于磁性分离器上至溶液澄清,用移液器吸去上清液,并取下离心管。
3.洗涤:
(1)加入3 mL Washing Buffer,漩涡震荡 1 min,使磁珠充分重悬,将离心管置于磁性分离器上直至溶液澄清,用移液器移去上清液并取下离心管。
(2)加入3 mL 75%(v/v)乙醇(用户自备),漩涡震荡1 min,使磁珠充分重悬,将离心管置于磁性分离器上直至溶液澄清,用移液器移去上清液并取下离心管。
(3)加入800 μL 75%(v/v)乙醇(用户自备),转移上清液至新的1.5 mL离心管中,漩涡震荡1 min,使磁珠充分重悬,并于室温下静置1 min,然后将离心管置于磁性分离器上直至溶液澄清,用移液器移去管盖及管底溶液。
注:步骤(3)可用小量程的移液器尽量除尽洗涤液。
4.干燥:保持离心管于磁性分离器上,于室温下静置10 min后,取下离心管。
注:干燥过程中若发现反应管中有液体残留时,可用小量程移液器吸弃液体。
5.洗脱:加入50 μL 55℃预热Elution Buffer,漩涡震荡1 min或用移液器缓慢吹打磁珠50次,使磁珠充分重悬,于55℃加热5 min后,将离心管置于磁性分离器上直至溶液澄清,转移上清液至新的1.5 mL离心管中,此即为纯化得到的游离DNA,可保存于-20℃。
注:本产品的洗脱体积可低至20 μL,但需注意洗脱效率与洗脱液体积有关,洗脱液体积越大,洗脱的核酸总量越多,但浓度越低。
注意事项:
1.操作之前,请务必认真阅读本产品手册。
2.提取效果与样本质量有关,应避免对样本进行反复冻融。
3.应避免对磁珠进行冷冻、离心等操作。
4.磁珠取用前应充分重悬均匀。
5.磁珠干燥前,应用移液器吸尽洗涤液。
6.应避免磁珠过度干燥,否则会严重降低核酸洗脱效率。
7.建议使用质量较好的离心管和移液器吸头,避免因粘附磁珠而造成损失。
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