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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
188
- 英文名:
Streptavidin Agarose Resin
- 保质期:
2年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
4℃
- 规格:
5ml|5×5mL|100mL
特别提示:包括链霉亲和素琼脂糖纯化树脂在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:链霉亲和素琼脂糖纯化树脂
英文名称:Streptavidin Agarose Resin
产品货号:SY0399
产品规格:5ml|5×5mL|100mL
本制品是一种生物素或生物素化的蛋白、抗体等物质的纯化树脂,其作用原理是基于链霉亲和素与生物素之间的相互作用,将链霉亲和素高度交联于6%琼脂糖上,独特的制备工艺使其具有更高的物理化学特性,可以耐受更高的压力,在相对较高的流速下,实现对目的蛋白的纯化,更适于工业大规模蛋白的纯化。
由于链霉亲和素与生物之间的亲和力很强,纯化时需要在变性条件下洗脱;而链霉亲和素对亚氨基生物素的亲和力相对较弱,可以在pH9.5-11.0结合,pH4.0时洗脱,不需要使用变性剂,所以能更好的保持亲和素偶联物的活性。
基质:高度交联的6%琼脂糖微球
配体:链霉亲和素
粒径:45-165μm
载量:>200nmolBiotin/mL介质
最大压力:0.3MPa,3 bar
pH稳定范围:pH2~10
储存缓冲液:20%乙醇
保存条件:4℃保存,有效期2年
需准备试剂:
所用水和Buffer在使用前最好用0.22μm或0.45μm滤膜过滤除菌。
生物素或生物素化物质的纯化
结合/洗杂缓冲液:150mMNaCl,20mMNaH2PO4,pH7.4
洗脱缓冲液:8M盐酸胍,pH 1.5
亚氨基生物素标签物质的纯化
结合/洗杂缓冲液:50mM碳酸铵,0.5M NaCl,pH10.0
洗脱缓冲液:50mM碳酸铵,0.5M NaCl,pH 4.0
注意事项:
1)请勿冷冻保存本产品。
2)所有操作过程中,样本需要在4℃或冰上操作。
3)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法:
注:样品在上样前最好用0.22μm或0.45μm滤膜过滤,减少杂质以防阻塞柱子。另外,确保样品溶液有合适的离子强度和pH值,可以用结合/洗涤缓冲液对血清样品、腹水或细胞培养液稀释,或者样品用结合/洗涤缓冲液透析。
1.本树脂的装填(适用于各种中压色谱层析柱的填装)
1)用去离子水冲洗层析柱底筛板与接头,确保柱底筛板上无气泡,关闭柱底出口,并在柱底部留出1-2cm的去离子水。
2)将树脂悬浮起来,小心的将浆液连续地倒入层析柱中。用玻璃棒沿着柱壁倒入浆液可减少气泡的产生。
3)如果使用储液器,应立即在层析柱和储液器中加满水,将进样分配器放置于浆液表面,连接至泵上,避免在分配器或进样管中产生气泡。
4)打开层析柱底部出口,开起泵,使其在设定的流速下进行。最初应让缓冲液缓慢流过层析柱,然后缓慢增加至最终流速,这样可避免液压对所形成柱床的冲击,避免柱床形成的不均匀。如果达不到推荐的压力或流速,可以用所使用泵的最大流速,这样也可以得到一个很好的装填效果。
注:在随后的色谱程序中,不要超过最大装柱流速的75%,当柱床高度稳定后,在最后的装柱流速下至少再上3倍柱床体积的去离子水。标上柱床高度。
5)关闭泵,关闭层析柱出口。
6)如果使用储液器,去除储液器,将分配器至于层析柱中。
7)将分配器推向柱子至标记的柱床高度处。允许装柱液进入分配器,锁紧分配器接头。
8)将装填好的层析柱连接至泵或色谱系统中,开始平衡。如果需要可以重新调整分配器。
2.样品纯化(以?KTA为例)
1)平衡:用5倍柱体积的结合Buffer平衡层析柱,使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下,起到保护蛋白的作用。
2)上样:将样品加到平衡好的层析柱中,保证目的蛋白与树脂充分接触,提高目的蛋白的回收率,收集流出液,待检测。
3)洗杂:用10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗,去除非特异性吸附的杂蛋白,收集洗杂液,待检测。
4)洗脱:使用5-10倍柱体积的洗脱缓冲液,收集洗脱液,即目的蛋白溶液。
5)清洗及保存:依次使用3倍柱体积的结合Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料,最后再用5倍柱体积的20%的乙醇平衡,然后保存在等体积的20%的乙醇中,置于4度保存,防止填料被细菌污染。
3.SDS-PAGE检测
将纯化过程中得到的样品(包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等)利用SDS-PAGE进行检测,判定其纯化效果。
4.填料清洗
随着非特异结合蛋白的增多和蛋白的聚集,会造成流速和结合载量性能下降,此时需对填料进行清洗。
1)去除一些沉淀或变形物质
用2倍柱体积的0.1M NaOH或6M盐酸胍或8M尿素溶液进行清洗,然后立即用5倍柱体积的PBS,pH 7.4清洗。
2)去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质
用3-4倍柱体积的70%乙醇或2倍柱体积1%Triton X-100清洗,然后立即用5倍柱体积的PBS,pH 7.4清洗。
我公司销售的链霉亲和素琼脂糖纯化树脂北京厂家,链霉亲和素琼脂糖微球,链霉亲和素琼脂糖填料,链霉亲和素琼脂糖介质质量上佳,价格普惠,欢迎广大新老客户踊跃订购。
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。 这就要求下游纯化工艺提高单位时间的处理量,国家生化工程技术研究中心(北京)推出的高流速琼脂糖介质产品平台为应对该问题提供了全新的解决途径,作为处理量更快、生产效率更高的介质,高流速琼脂糖介质对于提高企业生产力水平、降低生产成本、促进生物行业发展具有重要意义。 高流速琼脂糖介质具有高刚性的骨架,将高流速与高载量完美地融合在一起,能够迅速、高效地处理目标蛋白。高流速琼脂糖介质在良好的亲水性、化学稳定性以及孔道结构的基础上,刚性更强、传质速度更快,特别适合在更短的时间内处理更多的物料
「诱饵」蛋白,「诱饵」蛋白的互作蛋白称为「猎物」蛋白。「诱饵」蛋白与「猎物」蛋白结合后,利用靶蛋白—抗体— Protein A/G —磁珠/琼脂糖珠的结合方式获取复合物,再通过 SDS-PAGE、Western blot 或质谱等方法进一步对复合物中的靶蛋白进行分析。 免疫共沉淀方法简单,是识别感兴趣蛋白质的相互作用、深入了解其结构和功能的初步实验方法。但是它也有相应的局限性,比如很难验证两种蛋白质是否直接发生相互作用、不能得到这种相互作用亲和力等定量信息等。因此需要在相互作用分析与筛选后,使用
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