(ALPHA)-Synuclein α-突触核蛋白

α-突触核蛋白聚集检测试剂盒是模仿在路易体痴呆/帕金森病/多系统萎缩发现的细胞内α-突触核蛋白聚集。

　　在细胞培养检测中的细胞凝集抑制和/或预防作用可用此试剂盒检测。

 

◆背景 　　痴呆症是使记忆和辨别能力产生退化丢失的疾病，还没有根本性的治疗。经过多年的科学研究证实，蛋白凝集发生在许多神经变性疾病（包括痴呆症）的大脑退化部分，表明这种聚集的出现与这些疾病的发生和发展密切相关。 　　聚集发生时，正常蛋白形式因特殊原因形成异常结构，并积累在细胞中，每一种疾病有不同的聚集蛋白。在帕金森病/路易体痴呆/多系统萎缩病人脑内，α-突触核蛋白形式结构发生异常。 　　α-突触核蛋白聚集检测试剂盒模仿体内“α-突触核蛋白”的聚集，是可在体外筛选的活性成分。

 

◆试剂盒组成

 

组成	容量	规格	保存
pCMV-SNCA (α - Synuclein 表达质粒载体, 红盖)  (浓度1.25 μg/μL)	32 μL	1 小瓶	4°C 不冻结
pCMV-NC(阴性对照载体, 绿盖) (浓度1.25 μg/μL)	5 μL	1 小瓶
pCMV-dGFP(dGFP 表达质粒载体, 蓝盖) (浓度1.25 μg/μL)	5 μL	1 小瓶
20 mM Tris-HCl Buffer (pH7.4)	10 mL	1 瓶
F-αSyn (α - Synuclein 原纤维, 黄盖) (浓度1 μg/μL)	32 μL	1 小瓶
Multifectam (基因转染试剂)	0.33 mg	1 瓶

 

◆检测流程

 

 

 

◆实例

 

一  免疫印迹法Western blotting (使用各种突触核蛋白抗体)

1、除去培养基。

2、每个孔添加 1 mL PBS, 用移液管收集细胞。

3、离心 (4,500 rpm [1,800 x g], 5 分钟,室温), 收集颗粒。

4、添加 0.1 mL 裂解缓冲液(10 mM Tris-HCl, pH 7.5 含 0.8 M NaCl, 1 mM乙二醇双（2-胺基乙基醚）-

　  N，N，N，N-四乙酸 (EGTA), 1 mM DTT 和 1% N-月桂酰肌氨酸钠), 超声波混合。

5、离心 (50,000 rpm [100,000 x g], 20 分钟, 室温)。

6、添加 40 µL 2 x SDS Buffer (0.125 M Tris-HCl pH6.8, 200 mM 1,4二硫苏糖醇(DTT), 4% 十二烷基硫酸钠

　  (SDS) , 10%蔗糖, 0.01% BPB) 至颗粒中,超声波混合, 加热 (100 °C,5 分钟), 进行 10 µL/well 的免疫印迹。

 

二  淀粉样蛋白/物质荧光染色试剂盒

　　使用淀粉样蛋白/物质荧光染色试剂盒(Cosmo Bio,产品编号：CSR-SYN02-COS)，可对已发生聚集的α-突触核蛋白和核仁进行双重染色。

 

阴性对照载体（pCMV-NC）
相位差	核染色	突触核蛋白聚集
使用α-突触核蛋白（pCMV-SNCA+F-α Syn）
相位差	核染色	突触核蛋白聚集

 

仅用于研究。不得用于人类基因治疗或临床诊断。