α-突触核蛋白聚集检测试剂盒是模仿在路易体痴呆/帕金森病/多系统萎缩发现的细胞内α-突触核蛋白聚集。
在细胞培养检测中的细胞凝集抑制和/或预防作用可用此试剂盒检测。
◆背景 痴呆症是使记忆和辨别能力产生退化丢失的疾病,还没有根本性的治疗。经过多年的科学研究证实,蛋白凝集发生在许多神经变性疾病(包括痴呆症)的大脑退化部分,表明这种聚集的出现与这些疾病的发生和发展密切相关。 聚集发生时,正常蛋白形式因特殊原因形成异常结构,并积累在细胞中,每一种疾病有不同的聚集蛋白。在帕金森病/路易体痴呆/多系统萎缩病人脑内,α-突触核蛋白形式结构发生异常。 α-突触核蛋白聚集检测试剂盒模仿体内“α-突触核蛋白”的聚集,是可在体外筛选的活性成分。 |
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◆试剂盒组成
组成 |
容量 |
规格 |
保存 |
pCMV-SNCA (α - Synuclein 表达质粒载体, 红盖) (浓度1.25 μg/μL) |
32 μL |
1 小瓶 |
4°C 不冻结 |
pCMV-NC(阴性对照载体, 绿盖) (浓度1.25 μg/μL) |
5 μL |
1 小瓶 |
pCMV-dGFP(dGFP 表达质粒载体, 蓝盖) (浓度1.25 μg/μL) |
5 μL |
1 小瓶 |
20 mM Tris-HCl Buffer (pH7.4) |
10 mL |
1 瓶 |
F-αSyn (α - Synuclein 原纤维, 黄盖) (浓度1 μg/μL) |
32 μL |
1 小瓶 |
Multifectam (基因转染试剂) |
0.33 mg |
1 瓶 |
◆检测流程
◆实例
一 免疫印迹法Western blotting (使用各种突触核蛋白抗体)
1、除去培养基。
2、每个孔添加 1 mL PBS, 用移液管收集细胞。
3、离心 (4,500 rpm [1,800 x g], 5 分钟,室温), 收集颗粒。
4、添加 0.1 mL 裂解缓冲液(10 mM Tris-HCl, pH 7.5 含 0.8 M NaCl, 1 mM乙二醇双(2-胺基乙基醚)-
N,N,N,N-四乙酸 (EGTA), 1 mM DTT 和 1% N-月桂酰肌氨酸钠), 超声波混合。
5、离心 (50,000 rpm [100,000 x g], 20 分钟, 室温)。
6、添加 40 µL 2 x SDS Buffer (0.125 M Tris-HCl pH6.8, 200 mM 1,4二硫苏糖醇(DTT), 4% 十二烷基硫酸钠
(SDS) , 10%蔗糖, 0.01% BPB) 至颗粒中,超声波混合, 加热 (100 °C,5 分钟), 进行 10 µL/well 的免疫印迹。
二 淀粉样蛋白/物质荧光染色试剂盒
使用淀粉样蛋白/物质荧光染色试剂盒(Cosmo Bio,产品编号:CSR-SYN02-COS),可对已发生聚集的α-突触核蛋白和核仁进行双重染色。
阴性对照载体(pCMV-NC) |
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相位差 |
核染色 |
突触核蛋白聚集 |
使用α-突触核蛋白(pCMV-SNCA+F-α Syn) |
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相位差 |
核染色 |
突触核蛋白聚集 |
仅用于研究。不得用于人类基因治疗或临床诊断。