秋水仙胺

染色体 G 显带核型分析

。其所显示的染色体带纹清晰，普通显微镜下可以分辨，标本可长期保存，因此被广泛应用。实验步骤（以下以贴壁培养细胞为例）一、实验准备1）细胞完全培养基：根据细胞类型和实际需要确定2）细胞消化液：0.25% Trypsin-EDTA3）磷酸缓冲液（PBS）：pH7.44）秋水仙素（或者秋水仙胺）溶液：20 μg/mL5）低渗液：0.075 M KCl 溶液6）固定液（新鲜配制）：甲醇：冰醋酸 = 3：17）Giemsa 染色液：先配置 1% Giemsa 原液（以甘油，甲醇配制），再以 PBS 稀释 10 倍

体外染色体畸变试验方法及注意事项

1.5 倍的正常细胞周期时采样。如此方案在有或无代谢活化时均为阴性结果，应再进行一次无代谢活化的试验，适当延长染毒时间。某些化学物在染毒/采样时间长于 1.5 倍正常细胞周期时更易检测。在有代谢活化条件下得到阴性结果，需要根据情况予以证实。如认为阴性结果不必进行证实，应提供适当理由。5.3.3 染色体制备在收获前以秋水仙素或秋水仙胺处理细胞培养物 1～3 h。各个细胞培养物分别收获和低渗、固定和染色，以制备染色体。5.3.4 染色体分析包括阳性和阴性对照的所有涂片，应在显微镜分析之前独立编号

杂交瘤技术基本程序与方法

步骤如下： a. 在加秋水仙素前48-36小时将杂交瘤细胞传代。 b. 秋水仙素处理：在培养瓶中加入秋水仙素（100ug/ml，除菌，-20℃保存），使最终浓度为0.1-0.4ug/ml（若改用秋水仙胺则最终浓度为0.02-0.05ug/ml）；继续培养4-6小时，然后吹打细胞，移入离心管中，1000r/min 10分钟，弃上清。 c. 加入已预温到37℃的0.075mol/L KCl溶液5ml，将沉淀细胞悬浮并混匀，37℃水浴15-20分钟。 d. 向悬液中加入新配制的固定液（甲醇与冰醋酸3：1混合）1ml