使用说明: 1. 对于贴壁细胞: a. 对于6孔板中培养的细胞,吸除细胞培养液,用PBS或HBSS洗涤1次,加入1毫升β-半乳糖苷酶染色固定液,室温固定15分钟。对于其它类型的培养板,固定液及后续溶液的用量参照此比例进行操作。 b. 吸除细胞固定液,用PBS或HBSS洗涤细胞3次,每次3分钟。 c. 吸除PBS或HBSS,每孔加入1毫升染色工作液。染色工作液的配制方法参考表1。
β-半乳糖苷酶染色液A
10μl
β-半乳糖苷酶染色液B
10μl
β-半乳糖苷酶染色液C
930μl
X-Gal溶液
50μl
d. 37℃孵育过夜,可以用parafilm或保鲜膜封住6孔板防止蒸发。注意:37℃孵育不能在二氧化碳培养箱中进行。 e. 普通光学显微镜下观察。如不能及时观察计数,可以去除染色工作液,加入2毫升PBS,4℃可以保存数天;或者加上封片液封片后,4℃可以保存较长时间。 2. 对于悬浮细胞: a. 离心收集细胞至1.5ml离心管内,用PBS或HBSS洗涤1次,加入1毫升β-半乳糖苷酶染色固定液,室温固定15分钟。固定时可以在摇床上缓慢摇动,以避免细胞结成团块。 b. 离心,吸除细胞固定液,用PBS或HBSS洗涤细胞3次,每次3分钟。 c. 离心,吸除PBS或HBSS,每管加入0.5-1毫升染色工作液。染色工作液的配制方法参考表1。 d. 37℃孵育过夜。注意:37℃孵育不能在二氧化碳培养箱中进行。 e. 取部分染色后的细胞,滴加到载玻片上或6孔板内,普通光学显微镜下观察。如不能及时观察计数,可以离心,去除染色工作液,然后加入1毫升PBS,4℃可以保存数天。如果离心,取细胞用于涂片,加上封片液封片后,4℃可以保存较长时间。 3. 对于组织切片: a. 对于石蜡切片先按照常规方法进行脱蜡和水化处理。对于冷冻切片直接按照以下步骤进行。 b. 加入适当体积的β-半乳糖苷酶染色固定液,以充分盖住组织为宜,室温固定不少于15分钟。 c. 用PBS浸泡洗涤组织3次,每次不少于5分钟。 d. 吸除PBS,加入适当量的染色工作液。染色工作液的配制方法参考表1。 e. 37℃孵育过夜,可以用parafilm或保鲜膜封住防止蒸发。最好把整个切片浸泡在染色工作液中。 注意:37℃孵育不能在二氧化碳培养箱中进行。 f. 普通光学显微镜下观察。如不能及时观察,加上封片液封片后4℃可以保存较长时间。