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- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
53
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
500T
【培养指南】
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
中文名称：中性红细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒规格
英文名称：
产品规格：500T
发货周期：1～3天
产品说明
中性红可以被活细胞所摄入，并在溶酶体中积累。在细胞增殖加快时，细胞数量增多，可以摄入的中性红的量就会增加。在细胞受到损伤时，中性红的摄入能力会下降。这样通过对于中性红摄入量的不同就可以确定细胞的增殖或毒性情况。中性红同时也是一种pH指示剂，在酸性时呈红色，在pH6.8升至pH8.0时由红色逐渐转变为黄色。细胞核中的核酸呈酸性，因此细胞核会被染成红色。由于溶酶体(lysome)中也是酸性环境，因此溶酶体也可以被中性红染色液染成红色。
使用方法
1．把细胞培养在96孔培养板内，密度1000-10000/孔,每孔加入200μl细胞培养液，并给予药物刺激。
2．至待检测时间点，如果培养液中的药物推测不会对后续检测产生干扰，直接加入20μl中性红染色液；如果培养液中的药物可能会对后续检测产生干扰，先用PBS、DPBS或HBSS等适当溶液洗涤1-2次，随后加入200μl细胞培养液，并加入20μl中性红染色液。
3．细胞培养箱内孵育2小时。(对于细胞密度非常低，细胞代谢速率非常慢的情况，可以把孵育时间延长到3-4个小时)。
4．去除含有中性红染色液的细胞培养液，用PBS、DPBS或HBSS等适当溶液洗涤1-2次。
5．加入200μl中性红检测液，室温摇床上裂解10分钟。在摇床上摇动可以促进样品的裂解。
6．测定样品的A540，可以选择690nm作为参考波长。
7．同时设置调零孔，对照孔。
操作步骤(仅供参考)：
1、贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
【细胞冻存】
中性红细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒规格待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
【复苏的原则】
产品名称快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类：
第一种：
是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
钨酸锶/二锶/Strontium fluoride
3-溴-2-氧基啶酸锶/酸锶/Strontium acetate
5-溴-2-氧基-3-砒啶钼酸/钼酸/Sodium phosphomolybdate hydrate
5--2-氧基啶亚酸二五水合物/五水亚酸/Sodium phosphite dibasic pentahydrate
3--2-氧基砒啶酸/Sodium phenylpyruvate
化钕六水合物高酸/过酸/偏高酸/Sodium periodate
次酸镍六水合物D-泛酸/右旋泛酸/(R)-N-(2,4-二羟基-3,3-二基-1-氧代基)- β-酸单盐/D-本多生酸/泛酸/D(+)-泛酸/Sodium D-pantothenate
六水合酸镁铵草酸/Sodium oxamate
(4-基)邻二酸/二酸/1,2-二羧酸单盐/邻二酸盐/二酸/酞酸/Sodium hydrogen phthalate
2-酰噻吩酸/Sodium decanoate
中性红细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒规格NP-40裂解 规格HPLC≥98%;20mgEupatilin
RIPA裂解（强） 规格HPLC≥98%;20mgSkimmin
RIPA裂解（弱） 规格HPLC≥98%;50mgSkimmianine
RIPA裂解（中） 规格HPLC≥95%;0.1mlGinkgolide A
动物细胞核蛋白微量制备试剂盒 （100次） 规格HPLC≥95%;20mgGinkgolide B
动物细胞核蛋白微量制备试剂盒 （25次） 规格UV≥98%;20mgGinkgolide C
动物细胞裂解（A） 规格HPLC≥95%;20mgGinkgolide J
动物细胞裂解（B） 规格HPLC≥95%;20mgGinkgetin
动物线粒体总蛋白提取试剂盒（见关联产品） 规格HPLC≥95%;20mgGinkgolic Acid (C130)
动植物膜蛋白微量制备试剂盒 规格HPLC≥98%;20mgGinkgolic Acid (C151)
动植物总蛋白微量提取试剂盒 规格HPLC≥98%;20mgIcarisid I
昆虫细胞裂解（见关联产品） 规格HPLC≥95%;20mgIcarisid II；BaohuosideI
石蜡包埋组织蛋白提取试剂盒（见关联产品） 规格HPLC≥98%;20mgIcariin
细胞核蛋白提取试剂盒（见关联产品） 规格HPLC≥98%;20mgIcaritin
体样品蛋白化回收试剂盒 规格HPLC≥98%;20mgCryptotanshinone
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
中文名称：中性红细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒规格
英文名称：
产品规格：500T
发货周期：1～3天
产品说明
中性红可以被活细胞所摄入，并在溶酶体中积累。在细胞增殖加快时，细胞数量增多，可以摄入的中性红的量就会增加。在细胞受到损伤时，中性红的摄入能力会下降。这样通过对于中性红摄入量的不同就可以确定细胞的增殖或毒性情况。中性红同时也是一种pH指示剂，在酸性时呈红色，在pH6.8升至pH8.0时由红色逐渐转变为黄色。细胞核中的核酸呈酸性，因此细胞核会被染成红色。由于溶酶体(lysome)中也是酸性环境，因此溶酶体也可以被中性红染色液染成红色。
使用方法
1．把细胞培养在96孔培养板内，密度1000-10000/孔,每孔加入200μl细胞培养液，并给予药物刺激。
2．至待检测时间点，如果培养液中的药物推测不会对后续检测产生干扰，直接加入20μl中性红染色液；如果培养液中的药物可能会对后续检测产生干扰，先用PBS、DPBS或HBSS等适当溶液洗涤1-2次，随后加入200μl细胞培养液，并加入20μl中性红染色液。
3．细胞培养箱内孵育2小时。(对于细胞密度非常低，细胞代谢速率非常慢的情况，可以把孵育时间延长到3-4个小时)。
4．去除含有中性红染色液的细胞培养液，用PBS、DPBS或HBSS等适当溶液洗涤1-2次。
5．加入200μl中性红检测液，室温摇床上裂解10分钟。在摇床上摇动可以促进样品的裂解。
6．测定样品的A540，可以选择690nm作为参考波长。
7．同时设置调零孔，对照孔。
操作步骤(仅供参考)：
1、贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
【细胞冻存】
中性红细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒规格待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
【复苏的原则】
产品名称快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类：
第一种：
是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
钨酸锶/二锶/Strontium fluoride
3-溴-2-氧基啶酸锶/酸锶/Strontium acetate
5-溴-2-氧基-3-砒啶钼酸/钼酸/Sodium phosphomolybdate hydrate
5--2-氧基啶亚酸二五水合物/五水亚酸/Sodium phosphite dibasic pentahydrate
3--2-氧基砒啶酸/Sodium phenylpyruvate
化钕六水合物高酸/过酸/偏高酸/Sodium periodate
次酸镍六水合物D-泛酸/右旋泛酸/(R)-N-(2,4-二羟基-3,3-二基-1-氧代基)- β-酸单盐/D-本多生酸/泛酸/D(+)-泛酸/Sodium D-pantothenate
六水合酸镁铵草酸/Sodium oxamate
(4-基)邻二酸/二酸/1,2-二羧酸单盐/邻二酸盐/二酸/酞酸/Sodium hydrogen phthalate
2-酰噻吩酸/Sodium decanoate
中性红细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒规格NP-40裂解 规格HPLC≥98%;20mgEupatilin
RIPA裂解（强） 规格HPLC≥98%;20mgSkimmin
RIPA裂解（弱） 规格HPLC≥98%;50mgSkimmianine
RIPA裂解（中） 规格HPLC≥95%;0.1mlGinkgolide A
动物细胞核蛋白微量制备试剂盒 （100次） 规格HPLC≥95%;20mgGinkgolide B
动物细胞核蛋白微量制备试剂盒 （25次） 规格UV≥98%;20mgGinkgolide C
动物细胞裂解（A） 规格HPLC≥95%;20mgGinkgolide J
动物细胞裂解（B） 规格HPLC≥95%;20mgGinkgetin
动物线粒体总蛋白提取试剂盒（见关联产品） 规格HPLC≥95%;20mgGinkgolic Acid (C130)
动植物膜蛋白微量制备试剂盒 规格HPLC≥98%;20mgGinkgolic Acid (C151)
动植物总蛋白微量提取试剂盒 规格HPLC≥98%;20mgIcarisid I
昆虫细胞裂解（见关联产品） 规格HPLC≥95%;20mgIcarisid II；BaohuosideI
石蜡包埋组织蛋白提取试剂盒（见关联产品） 规格HPLC≥98%;20mgIcariin
细胞核蛋白提取试剂盒（见关联产品） 规格HPLC≥98%;20mgIcaritin
体样品蛋白化回收试剂盒 规格HPLC≥98%;20mgCryptotanshinone
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
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文献和实验相关实验
CCK 试剂盒，为 MTT 法的替代方法，是一种基于 WST（水溶性四唑盐，化学名：2 -（2 - 甲氧基 - 4 - 硝苯基）- 3 -（4 - 硝苯基）- 5 -（2,4 - 二磺基苯）- 2H - 四唑单钠盐）的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。CCK 法与其它检测方法之间的比较
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技术资料暂无技术资料 索取技术资料
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