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- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
31
- 英文名：
Annexin V-APC Apoptosis Detection Kit
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
10T|20T|50T|100T
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
中文名称：Annexin V-APC细胞凋亡检测试剂盒规格
英文名称：Annexin V-APC Apoptosis Detection Kit
产品规格：10T|20T|50T|100T
发货周期：1～3天
在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS）只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。AnexinV是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此AnexinV被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将AnexinV进行荧光素APC标记，以标记了的AnexinV作为荧光探针，利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。\
本试剂盒可应用于培养细胞凋亡检测（不推荐用于检测组织样本）。
操作步骤(仅供参考)：
1、贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
【细胞冻存】
Annexin V-APC细胞凋亡检测试剂盒规格待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
【复苏的原则】
产品名称快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类：
第一种：
是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
3,4-二氟水杨酸邻胺盐酸/盐二胺/1,2-胺盐酸/OPD-HC1
1-Boc-4-基-4-啶酸二胺四酸二钠铜盐/二胺四酸铜二钠/EDTA二钠铜/Ethylenediaminetetraacetic acid copper(II) disodium salt
4-叔氧羰基-2-吗啉酸二胺四酸二钠锌盐/二胺四酸锌二钠/EDTA二钠锌/Disodium zinc ethylenediaminetetraacetate tetrahydrate
1-异基吡唑二胺四酸二钠锰盐/二胺四酸锰二钠/EDTA二钠锰/Ethylenediaminetetraacetic acid manganese disodium salt hydrate
4,5-二氟邻苯二酸酐二胺四酸二钠钙盐/二胺四酸钙二钠/EDTA二钠钙/依地酸钙二钠二水合物/EDTA-2NaCa
4,5-二氟邻苯二酸二胺四酸二钠盐/四酸二氨基烯二钠盐/托立龙B/氨羧络合剂III/螯合剂III/络合酮II/ EDTA二钠/EDTA-2Na
5-溴-2-苯N-羟基二胺-N，N′,N′-三酸三钠/氨基醇胺三酸三钠/N-羟基二胺三酸三钠/N-(2-羟基)二胺三酸三钠/N-(2-羟基)二胺-N,N,N-三酸三钠/羟基烯二胺三酸三钠/N-二-羟基-亚基二胺三酸三钠/HEDTA-Na3
六水六氟镁N-羟基二胺-N，N′,N′-三酸/氨基醇胺三酸/N-羟基二胺三酸/N-(2-羟基)二胺三酸/N-(2-羟基)二胺-N,N,N-三酸/羟基烯二胺三酸/N-二-羟基-亚基二胺三酸/HEDTA/HEEDTA
1-叔氧羰基-4-氨基啶盐酸盐二胺四酸二钠镁盐/EDTA二钠镁/二胺四酸镁二钠盐/EDTA-MgNa2
苯基三基铵(的醇溶)二胺四酸二钠镁盐四水物/EDTA二钠镁四水物/二胺四酸镁二钠盐四水物/EDTA-MgNa2
Annexin V-APC细胞凋亡检测试剂盒规格Tungstic acid(T-4)-二合钨5克85%
Tungsten(VI)oxide钨500克4N，0.2㎜
Tungsten hexachloride六化钨25克3.5N，0.1㎜
Tungsten carbide一化钨25克5N
Tungsten钨25克99.7%
TTP三磷脱胸苷盐500毫克生物技术级，95%
TTHA三四六0.5毫升BR，1Mm/L
TTAC肉豆蔻基三基化铵5克颗粒
TTAB溴化十四基三基铵1克粉末
TTA1-(2’-酰)-3,3,3-三5克BR
TSPP decahydrate焦磷四十水物1克高，
TSPP焦磷四10克高，
TSP正磷100克
TSP无水磷三100克99%
TSC基脲5克19.3%
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
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文献和实验Annexin V是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸PS有高度亲和力，可通过细胞外侧暴露的PS与凋亡早期细胞胞膜结合，将Annexin V标记上荧光染料利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡。 由于凋亡晚期或坏死细胞膜完整性丧失，细胞核染色液可进入细胞内染色细胞核，搭配Annexin V使用可将处于不同凋亡时期的细胞区分开。 A．悬浮细胞： 按照实验方案进行凋亡诱导，300 g离心5 min，弃上清，收集细胞，用PBS洗涤细胞一次，轻轻重悬浮细胞并计数。 取1~5 ×
Annexin V 是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸 PS 有高度亲和力，可通过细胞外侧暴露的PS与凋亡早期细胞胞膜结合，将 Annexin V 标记上荧光染料利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡。 由于凋亡晚期或坏死细胞膜完整性丧失，细胞核染色液可进入细胞内染色细胞核，搭配 Annexin V 使用可将处于不同凋亡时期的细胞区分开。 A．悬浮细胞： 按照实验方案进行凋亡诱导，300 g 离心 5 min，弃上清，收集细胞，用PBS洗涤细胞一次，轻轻重悬浮细胞并计数
Q：Annexin V 凋亡检测试剂盒的原理是什么？ A：Annexin V 是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸 PS 有高度亲和力，可通过细胞外侧暴露的 PS 与凋亡早期细胞胞膜结合，将 Annexin V 标记荧光染料如 FITC 利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡。 碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)或 7-AAD 可与双链 DNA 特异性结合，并产生强烈的荧光，正常情况下无法透过细胞膜。由于凋亡晚期或坏死细胞膜丧失完整性，核染料 PI 或 7-AAD
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