b. 按上表设置好反应体系后,轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀),随后离心沉淀液体。 c. 37℃孵育15分钟。 d. 70℃孵育15分钟或加入5μl 0.5M EDTA终止反应。 说明:标记的效率和3'羟基末端的类型有关,3'突出末端的标记效率要显著高于3'缩进末端或平末端的标记效率。 2. DNA末端加尾(DNA Tailing): a. 参考下表格设置反应体系:
DNA片断
1 pmol of 3'-termini
Reaction Buffer(5X)
4μl
dATP or dTTP
130pmol(20μCi)
或 dGTP or dCTP(四种中通常只需加入一种) (3000 Ci/mmol)
60pmol
TdT(20U/μl)
1.5μl
补充无核酸酶的去离子水
至20μl
b. 按上表设置好反应体系后,轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀),随后离心沉淀液体。 c. 37℃孵育15分钟。 d. 70℃孵育15分钟或加入5μl 0.5M EDTA终止反应。 说明:在上述反应条件下,每个3'羟基末端可以加上100-130个dA或dT,或20-30个dC或dG。 3. 其他用途可以参考上述用途或适当的文献资料进行。