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pGL6-miR (报告基因质粒)
一年
上海信裕生物科技有限公司
-20℃保存。
pGL6-miR (报告基因质粒)是信裕生物自行研发的一种用于microRNA(miRNA)等研究的萤光素酶报告基因质粒。该质粒可用于把目的基因的3'非翻译区(3'-untranslated region, 3'-UTR)或其它适当序列插入到其多克隆位点,然后在哺乳动物细胞中高灵敏度地检测特定microRNA(miRNA)或其它非编码RNA等对该基因3'-UTR或其它靶序列调控活性的报告基因质粒。
萤光素、萤光素酶、萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶也经常被称作荧光素、荧光素酶、萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶。
pGL6-miR以信裕生物的pGL6质粒为模板,具有氨苄青霉素抗性,并在萤火虫萤光素酶基因之后添加了多克隆位点,便于插入目的基因的3'-UTR或其它适当的靶序列。
pGL6-miR的主要工作原理是,把目的基因的3'非翻译区(3'-untranslated region, 3'-UTR)或其它适当序列插入到萤光素酶基因(luc2)的下游,转染细胞并检测萤光素酶的表达。如果细胞内源或外源表达的miRNA与靶序列结合,通常会抑制萤光素酶的翻译或促进mRNA的降解,从而使萤光素酶的表达量减少。因此通过本报告基因质粒检测萤光素酶的表达水平,可以检测内源或外源表达的miRNA是否对插入的靶序列有调控作用。并且可以通过靶序列中预测的miRNA结合位点的突变,用于比较突变前后萤光素酶表达水平的变化。如果预测的miRNA位点突变后,miRNA的调控作用消失,则基本上说明突变的位点就是miRNA在靶序列中具体的结合位点。
pGL6-miR带有中低等强度的PGK启动子,有利于检测miRNA等对于萤火虫萤光素酶表达水平的下调作用,即当miRNA的抑制作用较弱时也能检测到。并且PGK启动子可以在人、大鼠、小鼠甚至酵母细胞中都可以发挥作用。
pGL6-miR质粒的主要信息如下:
Base pairs | 6097bp |
Feature Nucleotide | Position |
PGK promoter | 20-538 |
luc2 reporter gene | 549-2202 |
Multiple cloning region | 2208-2261 |
SV40 late poly(A) sinal | 2268-2512 |
SV40 early enhancer/promoter | 2554-2972 |
Synthetic neomycin phosphotransferase(Neor)coding region | 2998-3792 |
Synthetic poly(A) signal | 3817-3865 |
Synthetic Beta-lactamase(Ampr) coding region | 4980-5840 |
Synthetic poly(A) signal/transcriptional pause site | 5945-6097 |
pGL6-miR质粒图谱如下:
pGL6-miR质粒的多克隆位点的详细图谱如下(请特别注意其中的NheI不是单酶切位点):
KpnI NheI | |||||||||
2169 | AGGCCAAGAA | GGGCGGCAAG | ATCGCCGTGT |
|
|
||||
TCCGGTTCTT | CCCGCCGTTC | TAGCGGCACA |
|
|
|||||
BamHI EcoRV XhoI SacI MluI BglII HindIII | |||||||||
2220 | GGATCCGATA | TCCTCGAGGA | GCTCACGCGT | AGATCTAAGC |
|
||||
CCTAGGCTAT | AGGAGCTCCT | CGAGTGCGCA | TCTAGATTCG |
|
pGL6-miR中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pGL6-miR)包括:
Aat II | Afl II | Asc I | Ase I | Bsa I | BsaA I | BsiW I |
BssH II | Eco72 I | EcoR I | Nde I | Nru I | PflM I | Pme I |
Pml I | Psp1406 I | PspA I | Rsr II | Sam I | SnaB I | Spl I |
Srf I | Tth111 I | Vsp I | Xcm I |
pGL6-miR中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pGL6-miR once)包括:
Sfi I | GGCCN,NNN`NGGCC | 9 | Sal I | G`TCGA,C | 3881 | |
BspM II | T`CCGG,A | 445 | EcoN I | CCTNN`N,NNAGG | 3472 | |
BsaB I | GATNN|NNATC | 997 | Xba I | T`CTAG,A | 3796 | |
BsrG I | T`GTAC,A | 1040 | BsiC I | TT`CG,AA | 3867 | |
Dra III | CAC,NNN`GTG | 1696 | BstB I | TT`CG,AA | 3867 | |
Acc65 I | G`GTAC,C | 2209 | ApaL I | G`TGCA,C | 4445 | |
Asp718 | G`GTAC,C | 2209 | Ple I | GAGTC 9/10 | 4510 | |
Kpn I | G,GTAC`C | 2213 | HgiE II | ACCNNNNNNGGT -1/13 | 4710 | |
BamH I | G`GATC,C | 2221 | Not I | GC`GGCC,GC | 4951 | |
EcoR V | GAT|ATC | 2229 | BstX I | CCAN,NNNN`NTGG | 4975 | |
PaeR7 I | C`TCGA,G | 2233 | Pst I | C,TGCA`G | 4975 | |
Xho I | C`TCGA,G | 2233 | BstE II | G`GTNAC,C | 4978 | |
Sac I | G,AGCT`C | 243 | Ahd I | GACNN,N`NNGTC | 5053 | |
Mlu I | A`CGCG,T | 2245 | Bsu36 I | CC`TNA,GG | 5409 | |
Bgl II | A`GATC,T | 2251 | Pvu I | CG,AT`CG | 5423 | |
HinD III | A`AGCT,T | 2257 | Sac II | CC,GC`GG | 5447 | |
Apo I | R`AATT,Y | 2361 | Bst1107 I | GTA|TAC | 5563 | |
Mun I | C`AATT,G | 2425 | Xca I | GTA|TAC | 5563 |
pGL6-miR质粒中推荐使用的测序引物序列如下:
Forward primer (2135-2154): 5′GTTGGACGCCCGCAAGATCC 3′
Reverse primer (2303-2322): 5′GGTTTGTCCAAACTCATCAA 3′
pGL6-miR的全序列信息:D2106 pGL6-miR-seq.txt
包装清单:
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
XY-2106-1μg | pGL6-miR (报告基因质粒) | 1μg |
XY-2106-100μg | pGL6-miR (报告基因质粒) | 100μg |
— | 说明书 | 1份 |
保存条件:
-20℃保存。
注意事项:
本质粒未经信裕生物书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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